Proteína PED/PEA-15, PCOS, obesidad, índices de sensibilidad a la insulina, metformina, anticonceptivos orales

Asignaturas:

Veinte mujeres obesas con SOPQ (edad: 24,7±18 años; IMC: 30±2,4 kg/m2) fueron admitidas consecutivamente en la Unidad de Endocrinología del Departamento de Endocrinología y Oncología Molecular y Clínica de la Universidad Federico II de Nápoles, y se inscribieron en este estudio clínico. El diagnóstico de SOP se realizó de acuerdo con los criterios de diagnóstico de SOP. Al ingresar al estudio, las pacientes se aleatorizaron en dos grupos de tratamiento, de acuerdo con la sensibilidad a la insulina. Grupo OCP, 10 pacientes (IMC 29,7± 1,5 kg/m2) recibieron 30 µg de etinilestradiol más 30 mg de drospirenona 21 días/mes. Grupo MET, 10 pacientes (IMC 30,4± 3,1 kg/m2), recibieron metformina 1250 mg tres veces al día. La duración del seguimiento fue de 6 meses. El grupo de control estaba formado por 10 voluntarias sanas, de la misma edad.

Métodos:

Como todas las mujeres con SOP estaban anovulatorias, se sometieron a una prueba de provocación con progesterona (100 mg de progesterona natural i.m.; Prontogest, Amsa, Roma, Italia), que indujo sangrado uterino en todas las mujeres con SOP. Para excluir la presencia de diabetes tipo 2 o tolerancia anormal a la glucosa, se realizó la prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT) y se definió la respuesta normal de la glucosa a la OGTT según el 'Informe del Comité de Expertos en el diagnóstico y clasificación de la diabetes mellitus'. '.

Todas las medidas antropométricas se tomaron con sujetos vestidos únicamente con ropa ligera y sin zapatos. En cada mujer se midió el peso y la talla para calcular el IMC [peso (kg) dividido por la altura al cuadrado (m2), kg/m2]. La altura se midió al cm más cercano utilizando un estadiómetro montado en la pared. El peso corporal (BW) se determinó con una precisión de 50 g utilizando una balanza calibrada.

A los pacientes se les realizó una entrevista estandarizada para obtener información sobre la duración de la obesidad, patrones de alimentación, hábito tabáquico y ejercicio físico. En particular, también se pidió a los sujetos que hicieran un registro diario de la cantidad de actividad física (sin ejercicio; ≤2-3 h/semana; ≥2-3 h/semana). La ingesta de alimentos previa al ingreso y el historial dietético fueron evaluados por un dietista calificado que utilizó una entrevista asistida por computadora (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italia). Todas las mujeres con SOP recibieron una dieta normocalórica.

Ensayos:

Las muestras de sangre se obtuvieron entre las 08.00 hy las 09.00 h de una vena antecubital después de una noche de ayuno, con el paciente en posición de reposo. La SOG se realizó con 75 g de dextrosa. Se obtuvieron muestras de sangre a los 0, 30, 60, 90, 120 min para las mediciones de glucosa e insulina en plasma. Los niveles de glucosa plasmática en ayunas (FPG) se determinaron mediante el método de glucosa oxidasa inmediatamente después de la OGTT. Las muestras de insulina plasmática en ayunas (FPI) se centrifugaron rápidamente, el plasma se separó y se almacenó a -20 °C hasta el ensayo. El FPI se midió mediante un inmunoensayo enzimático quimioluminiscente en fase sólida utilizando kits comercialmente disponibles (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Ángeles, CA). Se calcularon 1/HOMA-IR, QUICKI e ISI.

La proteína PED/PEA-15 se midió en lisados ​​de glóbulos blancos (WBC) obtenidos de 10 a 12 ml de sangre entera no coagulada recién recolectada, después de la separación con dextrano al 6%, mediante análisis de transferencia Western. Para el análisis de transferencia Western, los leucocitos se solubilizaron a 4 °C en tampón TAT, se centrifugaron a 500 g durante 20 min y las fracciones sobrenadantes se almacenaron a -20 °C hasta su uso. La cantidad de 50 μg de lisado de proteínas se calentó a 100 °C en tampón Laemmli. Las proteínas se separaron mediante SDS-PAGE al 15% y luego se transfirieron a membranas Immobilon-P de 0,45 mm (Millipore, Bedfort, MA). Los filtros se probaron con antisuero PED/PEA-15 a una dilución de 1:2000, revelado por quimioluminiscencia mejorada y autorradiografía. Las bandas de proteínas se cuantificaron mediante densitometría láser y se expresaron como porcentaje de píxeles (unidades arbitrarias).