Protéine PED/PEA-15, SOPK, obésité, indices de sensibilité à l'insuline, metformine, contraceptifs oraux

Sujets:

Vingt femmes obèses atteintes du SOPK (âge : 24,7 ± 18 ans ; IMC : 30 ± 2,4 kg/m2) ont été admises consécutivement dans l'unité d'endocrinologie du département d'endocrinologie et d'oncologie moléculaire et clinique de l'Université Federico II de Naples, et ont été inscrites à cette étude clinique. Le diagnostic de SOPK a été posé selon les critères diagnostiques du SOPK. À l'entrée dans l'étude, les patients ont été randomisés en deux groupes de traitement, en fonction de la sensibilité à l'insuline. Groupe OCP, 10 patients (IMC 29,7 ± 1,5 kg/m2) ont reçu 30 µg d'éthinylestradiol plus 30 mg de drospirénone 21 jours/mois. Groupe MET, 10 patients (IMC 30,4 ± 3,1 kg/m2), ont reçu de la metformine 1250 mg trois fois par jour. La durée du suivi était de 6 mois. Le groupe témoin était composé de 10 femmes volontaires en bonne santé, appariées selon l'âge.

Méthodes :

Comme toutes les femmes atteintes du SOPK étaient anovulatoires, elles ont subi un test de provocation à la progestérone (100 mg de progestérone naturelle par voie intramusculaire ; Prontogest, Amsa, Rome, Italie), qui a induit des saignements utérins chez toutes les femmes atteintes du SOPK. Pour exclure la présence d'un diabète de type 2 ou d'une tolérance anormale au glucose, le test oral de tolérance au glucose (OGTT) a été réalisé et la réponse glycémique normale à l'OGTT a été définie selon le « Rapport du comité d'experts sur le diagnostic et la classification du diabète sucré ». '.

Toutes les mesures anthropométriques ont été prises avec des sujets portant uniquement des vêtements légers et sans chaussures. Chez chaque femme, le poids et la taille ont été mesurés pour calculer l'IMC [poids (kg) divisé par la taille au carré (m2), kg/m2]. La taille a été mesurée au centimètre près à l'aide d'un stadiomètre mural. Le poids corporel (PC) a été déterminé à 50 g près à l'aide d'une balance étalonnée à fléau.

Les patients ont reçu un entretien standardisé pour obtenir des informations sur la durée de l'obésité, les habitudes alimentaires, les habitudes de tabagisme et l'exercice physique. En particulier, les sujets ont également été invités à enregistrer quotidiennement la quantité d'activité physique (pas d'exercice ; ≤2-3 h/semaine ; ≥2-3 h/semaine). L'apport alimentaire avant l'admission et les antécédents alimentaires ont été évalués par un diététicien qualifié qui a utilisé un entretien assisté par ordinateur (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italie). Toutes les femmes SOPK ont reçu un régime normo-calorique.

Dosages :

Des échantillons de sang ont été prélevés entre 08h00 et 09h00 à partir d'une veine antécubitale après une nuit de jeûne, le patient étant en position de repos. L'OGTT a été réalisé en utilisant 75 g de dextrose. Des échantillons de sang ont été obtenus à 0, 30, 60, 90, 120 min pour les mesures de glucose plasmatique et d'insuline. Les taux de glucose plasmatique à jeun (FPG) ont été déterminés par la méthode de la glucose oxydase immédiatement après l'OGTT. Les échantillons d'insuline plasmatique à jeun (FPI) ont été rapidement centrifugés, le plasma a été séparé et stocké à -20°C jusqu'au dosage. Le FPI a été mesuré par un dosage immunoenzymatique chimiluminescent en phase solide en utilisant des kits disponibles dans le commerce (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI et ISI ont été calculés.

La protéine PED/PEA-15 a été mesurée dans des lysats de globules blancs (WBC) obtenus à partir de 10 à 12 ml de sang total non coagulé fraîchement prélevé, après séparation avec du dextran 6 %, en utilisant une analyse Western blot. Pour l'analyse Western blot, les WBC ont été solubilisés à 4°C dans du tampon TAT, centrifugés à 500 g pendant 20 min, et les fractions surnageantes ont été stockées à -20°C jusqu'à leur utilisation. La quantité de 50 μg de protéines de lysat a été chauffée à 100°C dans du tampon Laemmli. Les protéines ont été séparées par SDS-PAGE à 15 %, puis transférées sur des membranes Immobilon-P de 0 x 45 mm (Millipore, Bedfort, MA). Les filtres ont été sondés avec l'antisérum PED/PEA-15 à une dilution de 1:2000, révélée par une chimioluminescence et une autoradiographie améliorées. Les bandes protéiques ont été quantifiées par densitométrie laser et exprimées en pourcentage de pixels (unités arbitraires).