Proteine ​​PED/PEA-15, PCOS, Obesità, Indici di sensibilità all'insulina, Metformina, Contraccettivi orali

Soggetti:

Venti donne obese con PCOS (età: 24,7±18 anni; BMI: 30±2,4 kg/m2) sono state ricoverate consecutivamente presso l'Unità di Endocrinologia del Dipartimento di Endocrinologia e Oncologia Molecolare e Clinica dell'Università Federico II di Napoli, e sono state arruolate in questo studio clinico. La diagnosi di PCOS è stata effettuata secondo i criteri diagnostici per PCOS All'ingresso nello studio i pazienti sono stati randomizzati in due gruppi di trattamento, in base alla sensibilità all'insulina. Gruppo OCP, 10 pazienti (BMI 29,7 ± 1,5 kg/m2) hanno ricevuto 30 µg di etinilestradiolo più 30 mg di drospirenone 21 giorni/mese. Il gruppo MET, 10 pazienti (BMI 30,4 ± 3,1 kg/m2), ha ricevuto metformina 1250 mg tre volte al giorno. La durata del follow-up è stata di 6 mesi. Il gruppo di controllo era composto da 10 volontarie sane, di pari età.

Metodi:

Poiché tutte le donne con PCOS erano anovulatorie, sono state sottoposte a un test di provocazione del progesterone (100 mg di progesterone naturale i.m.; Prontogest, Amsa, Roma, Italia), che ha indotto sanguinamento uterino in tutte le donne con PCOS. Per escludere la presenza di diabete di tipo 2 o tolleranza al glucosio anormale, è stato eseguito il test di tolleranza al glucosio orale (OGTT) ed è stata definita la normale risposta del glucosio all'OGTT secondo il 'Rapporto del Comitato di esperti sulla diagnosi e classificazione del diabete mellito '.

Tutte le misurazioni antropometriche sono state effettuate con soggetti che indossavano solo abiti leggeri e senza scarpe. In ogni donna, peso e altezza sono stati misurati per calcolare il BMI [peso (kg) diviso altezza al quadrato (m2), kg/m2]. L'altezza è stata misurata al cm più vicino utilizzando uno stadiometro a parete. Il peso corporeo (PC) è stato determinato con l'approssimazione di 50 g utilizzando una bilancia a bilanciere calibrata.

Ai pazienti è stata data un'intervista standardizzata per ottenere informazioni sulla durata dell'obesità, sui modelli alimentari, sulle abitudini al fumo e sull'esercizio fisico. In particolare, ai soggetti è stato anche chiesto di registrare quotidianamente la quantità di attività fisica (nessun esercizio; ≤2-3 h/settimana; ≥2-3 h/settimana). L'assunzione di cibo prima del ricovero e la storia dietetica sono state valutate da un dietista esperto che ha utilizzato un'intervista assistita da computer (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italia). Tutte le donne PCOS hanno ricevuto una dieta normo-calorica.

Saggi:

I campioni di sangue sono stati prelevati tra le 08:00 e le 09:00 da una vena antecubitale dopo un digiuno notturno, con il paziente in posizione di riposo. L'OGTT è stato eseguito utilizzando 75 g di destrosio. I campioni di sangue sono stati ottenuti a 0, 30, 60, 90, 120 min per le misurazioni della glicemia e dell'insulina. I livelli di glucosio plasmatico a digiuno (FPG) sono stati determinati con il metodo della glucosio ossidasi immediatamente dopo l'OGTT. I campioni di insulina plasmatica a digiuno (FPI) sono stati prontamente centrifugati, il plasma è stato separato e conservato a -20°C fino al dosaggio. L'FPI è stato misurato mediante un saggio immunoenzimatico chemiluminescente in fase solida utilizzando kit disponibili in commercio (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). Sono stati calcolati 1/HOMA-IR, QUICKI e ISI.

La proteina PED/PEA-15 è stata misurata in lisati di globuli bianchi (WBC) ottenuti da 10 a 12 ml di sangue intero non coagulato appena raccolto, dopo separazione con destrano 6%, mediante analisi Western blot. Per l'analisi Western blot i WBC sono stati solubilizzati a 4°C in tampone TAT, centrifugati a 500 g per 20 minuti e le frazioni supernatanti sono state conservate a -20°C fino all'uso. La quantità di 50 μg di proteine ​​del lisato è stata riscaldata a 100°C in tampone Laemmli. Le proteine ​​sono state separate dal 15% di SDS-PAGE e quindi trasferite su membrane Immobilon-P da 0•45 mm (Millipore, Bedfort, MA). I filtri sono stati sondati con antisiero PED/PEA-15 a diluizione 1:2000, rivelato da chemiluminescenza potenziata e autoradiografia. Le bande proteiche sono state quantificate mediante densitometria laser ed espresse come percentuale di pixel (unità arbitrarie).