PED/PEA-15-protein, PCOS, fedme, insulinfølsomhedsindekser, metformin, orale præventionsmidler

Emner:

Tyve overvægtige PCOS-kvinder (alder: 24,7±18 år; BMI: 30±2,4 kg/m2) blev fortløbende indlagt på endokrinologisk enhed ved afdelingen for molekylær og klinisk endokrinologi og onkologi på Federico II University of Napoli og blev indskrevet i denne kliniske undersøgelse. Diagnosen af ​​PCOS blev stillet i henhold til de diagnostiske kriterier for PCOS. Ved studiestart blev patienterne randomiseret i to behandlingsgrupper i henhold til insulinfølsomhed. OCP-gruppen, 10 patienter (BMI 29,7± 1,5 kg/m2) modtog 30 µg ethinylestradiol plus 30 mg drospirenon 21 dag/måned. MET-gruppen, 10 patienter (BMI 30,4±3,1 kg/m2), fik metformin 1250 mg tre gange dagligt. Varigheden af ​​opfølgningen var 6 måneder. Kontrolgruppen bestod af 10 raske kvindelige frivillige, som var aldersvarende.

Metoder:

Da alle PCOS-kvinder var anovulatoriske, gennemgik de en progesteron-challenge-test (100 mg naturligt progesteron i.m.; Prontogest, Amsa, Rom, Italien), som inducerede uterinblødning hos alle PCOS-kvinder. For at udelukke tilstedeværelsen af ​​type 2-diabetes eller unormal glukosetolerance, blev den orale glukosetolerancetest (OGTT) udført, og den normale glukoserespons på OGTT blev defineret i henhold til 'Report of the Expert Committee on the diagnose and classification of diabetes mellitus '.

Alle antropometriske målinger blev taget med forsøgspersoner kun iført let tøj og uden sko. Hos hver kvinde blev vægt og højde målt for at beregne BMI [vægt (kg) divideret med højde i anden kvadrat (m2), kg/m2]. Højden blev målt til nærmeste cm ved hjælp af et vægmonteret stadiometer. Kropsvægt (BW) blev bestemt til nærmeste 50 g under anvendelse af en kalibreret balancestråleskala.

Patienterne fik et standardiseret interview for at få information om varigheden af ​​fedme, spisemønstre, rygevaner og fysisk træning. Især blev forsøgspersonerne også bedt om at lave en daglig registrering af mængden af ​​fysisk aktivitet (ingen træning; ≤2-3 t/uge; ≥2-3 t/uge). Fødeindtagelse før indlæggelse og kosthistorie blev vurderet af en dygtig diætist, som brugte et computerassisteret interview (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italien). Alle PCOS-kvinder modtog en diæt med normo-kalorieindhold.

Assays:

Blodprøver blev taget mellem kl. 08.00 og 09.00 fra en antecubital vene efter faste natten over med patienten i hvilestilling. OGTT blev udført under anvendelse af 75 g dextrose. Blodprøver blev udtaget ved 0, 30, 60, 90, 120 minutter til plasmaglucose- og insulinmålinger. Fastende plasmaglucoseniveauer (FPG) blev bestemt ved glucoseoxidasemetoden umiddelbart efter OGTT. Fastende plasmainsulin (FPI) prøver blev straks centrifugeret, plasma blev adskilt og opbevaret ved -20°C indtil analyse. FPI blev målt ved en fastfase kemiluminescerende enzymimmunoassay under anvendelse af kommercielt tilgængelige kits (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI og ISI blev beregnet.

PED/PEA-15-protein blev målt i lysater af hvide blodlegemer (WBC) opnået fra 10 til 12 ml frisk opsamlet ikke-koaguleret fuldblod, efter adskillelse med dextran 6 %, under anvendelse af Western blot-analyse. Til Western blot-analyse blev WBC solubiliseret ved 4°C i TAT-buffer, centrifugeret ved 500 g i 20 minutter, og supernatantfraktioner blev opbevaret ved -20°C indtil brug. Mængden af ​​50 μg lysatproteiner blev opvarmet til 100°C i Laemmli-buffer. Proteiner blev adskilt med 15 % SDS-PAGE og derefter overført til 0-45 mm Immobilon-P-membraner (Millipore, Bedfort, MA). Filtre blev probet med PED/PEA-15-antiserum ved 1:2000 fortynding, afsløret ved forstærket kemiluminescens og autoradiografi. Proteinbåndene blev kvantificeret ved laserdensitometri og udtrykt som procentdel af pixels (vilkårlige enheder).