PED / PEA-15-eiwit, PCOS, obesitas, insulinegevoeligheidsindexen, metformine, orale anticonceptiva

Onderwerpen:

Twintig zwaarlijvige vrouwen met PCOS (leeftijd: 24,7 ± 18 jaar; BMI: 30 ± 2,4 kg/m2) werden achtereenvolgens opgenomen op de afdeling Endocrinologie van de afdeling Moleculaire en Klinische Endocrinologie en Oncologie van de Federico II Universiteit van Napels, en werden ingeschreven in deze klinische studie. De diagnose PCOS werd gesteld volgens de diagnostische criteria voor PCOS. Bij aanvang van het onderzoek werden de patiënten gerandomiseerd in twee behandelingsgroepen, afhankelijk van de insulinegevoeligheid. OCP-groep, 10 patiënten (BMI 29,7 ± 1,5 kg/m2) kregen 30 µg ethinylestradiol plus 30 mg drospirenon 21 dagen/maand. MET-groep, 10 patiënten (BMI 30,4 ± 3,1 kg/m2), kregen driemaal daags metformine 1250 mg. De duur van de follow-up was 6 maanden. De controlegroep bestond uit 10 gezonde vrouwelijke vrijwilligers van dezelfde leeftijd.

methoden:

Omdat alle PCOS-vrouwen anovulatoir waren, ondergingen ze een progesteronprovocatietest (100 mg natuurlijke progesteron i.m.; Prontogest, Amsa, Rome, Italië), die bij alle PCOS-vrouwen baarmoederbloedingen veroorzaakte. Om de aanwezigheid van diabetes type 2 of abnormale glucosetolerantie uit te sluiten, werd de orale glucosetolerantietest (OGTT) uitgevoerd en werd de normale glucoserespons op de OGTT gedefinieerd volgens het 'Rapport van de commissie van deskundigen inzake de diagnose en classificatie van diabetes mellitus'. '.

Alle antropometrische metingen werden uitgevoerd met proefpersonen die alleen lichte kleding droegen en geen schoenen droegen. Bij elke vrouw werden gewicht en lengte gemeten om de BMI te berekenen [gewicht (kg) gedeeld door lengte in het kwadraat (m2), kg/m2]. De hoogte werd gemeten tot op de dichtstbijzijnde cm met behulp van een stadiometer aan de muur. Het lichaamsgewicht (BW) werd bepaald tot op 50 g nauwkeurig met behulp van een gekalibreerde weegschaal.

Patiënten kregen een gestandaardiseerd interview om informatie te verkrijgen over de duur van obesitas, eetpatronen, rookgewoonten en lichaamsbeweging. De proefpersonen werd met name ook gevraagd om dagelijks de hoeveelheid fysieke activiteit bij te houden (geen lichaamsbeweging; ≤2-3 uur/week; ≥2-3 uur/week). De voedselinname vóór de opname en de voedingsgeschiedenis werden beoordeeld door een bekwame diëtist die een computerondersteund interview gebruikte (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italië). Alle PCOS-vrouwen kregen een normo-calorisch dieet.

testen:

Bloedmonsters werden genomen tussen 08.00 uur en 09.00 uur uit een antecubitale ader na een nacht vasten, met de patiënt in de rustpositie. De OGTT werd uitgevoerd met 75 g dextrose. Bloedmonsters werden verkregen op 0, 30, 60, 90, 120 min voor plasmaglucose- en insulinemetingen. Nuchtere plasmaglucosespiegels (FPG) werden onmiddellijk na de OGTT bepaald met de glucose-oxidasemethode. Monsters van nuchtere plasma-insuline (FPI) werden direct gecentrifugeerd, plasma werd afgescheiden en tot de analyse bij -20°C bewaard. FPI werd gemeten door middel van een chemiluminescente enzymimmunoassay in de vaste fase met behulp van in de handel verkrijgbare kits (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI en ISI werden berekend.

PED/PEA-15-eiwit werd gemeten in lysaten van witte bloedcellen (WBC) verkregen uit 10 tot 12 ml vers verzameld niet-gecoaguleerd volbloed, na scheiding met dextran 6%, met behulp van Western-blotanalyse. Voor Western-blotanalyse werden WBC opgelost bij 4°C in TAT-buffer, gecentrifugeerd bij 500 g gedurende 20 min, en supernatansfracties werden bewaard bij -20°C tot gebruik. De hoeveelheid van 50 ug lysaateiwitten werd verwarmd tot 100°C in Laemmli-buffer. Eiwitten werden gescheiden door 15% SDS-PAGE en vervolgens overgebracht naar Immobilon-P-membranen van 0,45 mm (Millipore, Bedfort, MA). Filters werden onderzocht met PED/PEA-15-antiserum bij een verdunning van 1:2000, onthuld door verbeterde chemiluminescentie en autoradiografie. De eiwitbanden werden gekwantificeerd door laserdensitometrie en uitgedrukt als percentage pixels (willekeurige eenheden).