PED/PEA-15 蛋白、PCOS、肥胖、胰岛素敏感性指数、二甲双胍、口服避孕药

科目：

20 名肥胖 PCOS 女性（年龄：24.7±18 岁；BMI：30±2.4 kg/m2）连续入住那不勒斯费德里科二世大学分子与临床内分泌学和肿瘤学系的内分泌科，并被纳入这项临床研究。 PCOS 的诊断是根据 PCOS 的诊断标准进行的。在研究开始时，根据胰岛素敏感性，将患者随机分为两组进行治疗。 OCP 组，10 名患者 (BMI 29.7± 1.5 kg/m2) 接受 30 µg 炔雌醇加 30 mg 屈螺酮 21 天/月。 MET 组，10 名患者（BMI 30.4± 3.1 kg/m2），接受二甲双胍 1250 mg，每日 3 次。 随访时间为 6 个月。 对照组由 10 名年龄匹配的健康女性志愿者组成。

方法：

由于所有 PCOS 女性均无排卵，因此她们接受了黄体酮激发试验（肌注 100 毫克天然黄体酮；Prontogest, Amsa, Rome, Italy），所有 PCOS 女性均出现子宫出血。 为了排除 2 型糖尿病或糖耐量异常的存在，进行了口服葡萄糖耐量试验（OGTT），并根据“糖尿病诊断和分类专家委员会的报告”定义了对 OGTT 的正常葡萄糖反应'.

所有人体测量数据都是在受试者只穿轻便衣服且不穿鞋的情况下进行的。 在每位女性中，测量体重和身高以计算 BMI [体重 (kg) 除以身高的平方 (m2)，kg/m2]。 使用壁挂式测距仪测量高度，精确到厘米。 使用校准的平衡木秤确定体重 (BW)，精确到 50 g。

对患者进行了标准化访谈，以获取有关肥胖持续时间、饮食模式、吸烟习惯和体育锻炼的信息。 特别是，还要求受试者每天记录身体活动量（不运动；≤2-3 小时/周；≥2-3 小时/周）。 入院前食物摄入量和饮食史由使用计算机辅助访谈（Winfood 1.5，Medimatica srl，Martinsicuro，意大利）的熟练营养师评估。 所有 PCOS 女性都接受正常热量饮食。

化验：

在禁食过夜后，在 08:00 至 09:00 之间从肘前静脉获取血样，患者处于休息位置。 OGTT 使用 75 g 葡萄糖进行。 在 0、30、60、90、120 分钟时获取血样，用于血浆葡萄糖和胰岛素测量。 在 OGTT 后立即通过葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖 (FPG) 水平。 快速离心空腹血浆胰岛素 (FPI) 样品，分离血浆并储存在 -20°C 直至测定。 FPI 是使用市售试剂盒（Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA）通过固相化学发光酶免疫测定法测量的。 计算了 1/HOMA-IR、QUICKI 和 ISI。

在用 6% 葡聚糖分离后，使用蛋白质印迹分析在从 10 至 12 毫升新鲜收集的未凝固全血中获得的白细胞 (WBC) 裂解物中测量 PED/PEA-15 蛋白。 对于蛋白质印迹分析，WBC 在 4°C 下溶解在 TAT 缓冲液中，以 500g 离心 20 分钟，并将上清液部分储存在 -20°C 直至使用。 将 50 μg 裂解蛋白在 Laemmli 缓冲液中加热至 100°C。 蛋白质通过 15% SDS-PAGE 分离，然后转移到 0•45-mm Immobilon-P 膜（Millipore, Bedfort, MA）。 用 1:2000 稀释的 PED/PEA-15 抗血清探测过滤器，通过增强的化学发光和放射自显影显示。 通过激光光密度测定法对蛋白质条带进行量化，并表示为像素百分比（任意单位）。