PED/PEA-15-Protein, PCOS, Fettleibigkeit, Insulinsensitivitätsindizes, Metformin, orale Kontrazeptiva

Fächer:

Zwanzig adipöse PCOS-Frauen (Alter: 24,7 ± 18 Jahre; BMI: 30 ± 2,4 kg/m2) wurden nacheinander in die Abteilung für Endokrinologie der Abteilung für molekulare und klinische Endokrinologie und Onkologie der Universität Federico II von Neapel aufgenommen und dort eingeschrieben dieser klinischen Studie. Die Diagnose von PCOS wurde gemäß den diagnostischen Kriterien für PCOS gestellt. Bei Studieneintritt wurden die Patienten entsprechend ihrer Insulinsensitivität in zwei Behandlungsgruppen randomisiert. In der OCP-Gruppe erhielten 10 Patienten (BMI 29,7 ± 1,5 kg/m2) 30 µg Ethinylestradiol plus 30 mg Drospirenon an 21 Tagen/Monat. Die MET-Gruppe, 10 Patienten (BMI 30,4 ± 3,1 kg/m2), erhielt dreimal täglich 1250 mg Metformin. Die Dauer der Nachbeobachtung betrug 6 Monate. Die Kontrollgruppe bestand aus 10 gesunden weiblichen Freiwilligen gleichen Alters.

Methoden:

Da alle PCOS-Frauen anovulatorisch waren, wurden sie einem Progesteron-Challenge-Test (100 mg natürliches Progesteron i.m.; Prontogest, Amsa, Rom, Italien) unterzogen, der bei allen PCOS-Frauen Uterusblutungen hervorrief. Um das Vorliegen von Typ-2-Diabetes oder einer abnormalen Glukosetoleranz auszuschließen, wurde der orale Glukosetoleranztest (OGTT) durchgeführt und die normale Glukosereaktion auf den OGTT gemäß dem „Bericht des Expertenausschusses zur Diagnose und Klassifizierung von Diabetes mellitus“ definiert '.

Alle anthropometrischen Messungen wurden an Probanden durchgeführt, die nur leichte Kleidung und keine Schuhe trugen. Bei jeder Frau wurden Gewicht und Größe gemessen, um den BMI [Gewicht (kg) dividiert durch Körpergröße im Quadrat (m2), kg/m2] zu berechnen. Die Körpergröße wurde mit einem an der Wand montierten Stadiometer auf den nächsten Zentimeter genau gemessen. Das Körpergewicht (KG) wurde mit einer geeichten Schwebebalkenwaage auf 50 g genau bestimmt.

Die Patienten erhielten ein standardisiertes Interview, um Informationen über die Dauer der Adipositas, Essgewohnheiten, Rauchgewohnheiten und körperliche Bewegung zu erhalten. Insbesondere wurden die Probanden auch gebeten, täglich den Umfang ihrer körperlichen Aktivität aufzuzeichnen (keine körperliche Betätigung; ≤2–3 h/Woche; ≥2–3 h/Woche). Die Nahrungsaufnahme vor der Aufnahme und die Ernährungsgeschichte wurden von einem erfahrenen Ernährungsberater mithilfe eines computergestützten Interviews (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italien) beurteilt. Alle PCOS-Frauen erhielten eine normokalorische Diät.

Ergebnisse:

Blutproben wurden zwischen 08:00 und 09:00 Uhr aus einer Vena antecubitalis entnommen, nachdem der Patient über Nacht gefastet hatte und sich dabei in Ruheposition befand. Der OGTT wurde mit 75 g Dextrose durchgeführt. Blutproben wurden bei 0, 30, 60, 90, 120 Minuten für Plasmaglukose- und Insulinmessungen entnommen. Der Nüchtern-Plasmaglukosespiegel (FPG) wurde unmittelbar nach der OGTT mit der Glucoseoxidase-Methode bestimmt. Nüchternplasma-Insulinproben (FPI) wurden umgehend zentrifugiert, das Plasma abgetrennt und bis zum Test bei -20 °C gelagert. Der FPI wurde durch einen Festphasen-Chemilumineszenz-Enzymimmunoassay unter Verwendung kommerziell erhältlicher Kits (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA) gemessen. 1/HOMA-IR, QUICKI und ISI wurden berechnet.

Das PED/PEA-15-Protein wurde in Lysaten weißer Blutkörperchen (WBC) gemessen, die aus 10 bis 12 ml frisch gesammeltem, nicht koaguliertem Vollblut nach Trennung mit 6 % Dextran mithilfe einer Western-Blot-Analyse gewonnen wurden. Für die Western-Blot-Analyse wurden WBC bei 4 °C in TAT-Puffer solubilisiert, 20 Minuten lang bei 500 g zentrifugiert und die Überstandsfraktionen bis zur Verwendung bei -20 °C gelagert. Die Menge von 50 μg Lysatproteinen wurde in Laemmli-Puffer auf 100 °C erhitzt. Die Proteine ​​wurden durch 15 % SDS-PAGE aufgetrennt und dann auf 0,45 mm Immobilon-P-Membranen (Millipore, Bedfort, MA) übertragen. Die Filter wurden mit PED/PEA-15-Antiserum in einer Verdünnung von 1:2000 untersucht, was durch verstärkte Chemilumineszenz und Autoradiographie nachgewiesen wurde. Die Proteinbanden wurden durch Laserdensitometrie quantifiziert und als Prozentsatz der Pixel (willkürliche Einheiten) ausgedrückt.