PED/PEA-15-protein, PCOS, fedme, insulinfølsomhetsindekser, metformin, orale prevensjonsmidler

Emner:

Tjue overvektige PCOS-kvinner (alder: 24,7±18 år; BMI: 30±2,4 kg/m2) ble fortløpende innlagt på endokrinologisk enhet ved Institutt for molekylær og klinisk endokrinologi og onkologi ved Federico II-universitetet i Napoli, og ble registrert i denne kliniske studien. Diagnosen PCOS ble stilt i henhold til de diagnostiske kriteriene for PCOS Ved studiestart ble pasientene randomisert i to behandlingsgrupper, i henhold til insulinfølsomhet. OCP-gruppen, 10 pasienter (BMI 29,7± 1,5 kg/m2) fikk 30 µg etinyløstradiol pluss 30 mg drospirenon 21 dager/måned. MET-gruppen, 10 pasienter (BMI 30,4±3,1 kg/m2), fikk metformin 1250 mg tre ganger daglig. Varigheten av oppfølgingen var 6 måneder. Kontrollgruppen besto av 10 friske kvinnelige frivillige, som var alderstilpasset.

Metoder:

Siden alle PCOS-kvinner var anovulatoriske, gjennomgikk de en progesteronutfordringstest (100 mg naturlig progesteron i.m.; Prontogest, Amsa, Roma, Italia), som induserte livmorblødning hos alle PCOS-kvinner. For å utelukke tilstedeværelsen av type 2-diabetes eller unormal glukosetoleranse, ble den orale glukosetoleransetesten (OGTT) utført, og den normale glukoseresponsen på OGTT ble definert i henhold til 'Report of the Expert Committee on the diagnose and classification of diabetes mellitus '.

Alle antropometriske målinger ble tatt med forsøkspersoner kun iført lette klær og uten sko. Hos hver kvinne ble vekt og høyde målt for å beregne BMI [vekt (kg) delt på høyde i annen (m2), kg/m2]. Høyde ble målt til nærmeste cm ved hjelp av et veggmontert stadiometer. Kroppsvekt (BW) ble bestemt til nærmeste 50 g ved bruk av en kalibrert balanseskala.

Pasientene ble gitt et standardisert intervju for å få informasjon om varigheten av overvekt, spisemønster, røykevaner og fysisk trening. Spesielt ble forsøkspersonene også bedt om å gjøre en daglig registrering av mengden fysisk aktivitet (ingen trening; ≤2-3 t/uke; ≥2-3 t/uke). Matinntak før innleggelse og kostholdshistorie ble vurdert av en dyktig kostholdsekspert som brukte et dataassistert intervju (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italia). Alle PCOS-kvinner fikk en normo-kalori diett.

Analyser:

Blodprøver ble tatt mellom kl. 08.00 og 09.00 fra en antecubital vene etter faste over natten, med pasienten i hvilestilling. OGTT ble utført ved bruk av 75 g dekstrose. Blodprøver ble tatt ved 0, 30, 60, 90, 120 minutter for plasmaglukose- og insulinmålinger. Fastende plasmaglukosenivåer (FPG) ble bestemt ved glukoseoksidasemetoden umiddelbart etter OGTT. Fastende plasmainsulin (FPI) prøver ble raskt sentrifugert, plasma ble separert og lagret ved -20°C inntil analyse. FPI ble målt ved en fastfase kjemiluminescerende enzymimmunanalyse ved bruk av kommersielt tilgjengelige sett (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI og ISI ble beregnet.

PED/PEA-15-protein ble målt i lysater av hvite blodceller (WBC) oppnådd fra 10 til 12 ml ferskt oppsamlet ukoagulert fullblod, etter separasjon med dekstran 6 %, ved bruk av Western blot-analyse. For Western blot-analyse ble WBC solubilisert ved 4 °C i TAT-buffer, sentrifugert ved 500 g i 20 minutter, og supernatantfraksjoner ble lagret ved -20 °C til bruk. Mengden 50 μg lysatproteiner ble oppvarmet til 100°C i Laemmli-buffer. Proteiner ble separert med 15 % SDS-PAGE og deretter overført til 0•45 mm Immobilon-P-membraner (Millipore, Bedfort, MA). Filtre ble probet med PED/PEA-15-antiserum ved 1:2000 fortynning, avslørt ved forbedret kjemiluminescens og autoradiografi. Proteinbåndene ble kvantifisert ved laserdensitometri og uttrykt som prosentandel piksler (vilkårlige enheter).