PED/PEA-15-protein, PCOS, fetma, insulinkänslighetsindex, metformin, orala preventivmedel

Ämnen:

Tjugo feta PCOS-kvinnor (ålder: 24,7±18 år; BMI: 30±2,4 kg/m2) togs in i följd på endokrinologiska enheten vid avdelningen för molekylär och klinisk endokrinologi och onkologi vid Federico II-universitetet i Neapel, och var inskrivna i denna kliniska studie. Diagnosen PCOS ställdes enligt de diagnostiska kriterierna för PCOS. Vid studiestart randomiserades patienterna i två behandlingsgrupper, beroende på insulinkänslighet. OCP-grupp, 10 patienter (BMI 29,7±1,5 kg/m2) fick 30 µg etinylestradiol plus 30 mg drospirenon 21 dagar/månad. MET-gruppen, 10 patienter (BMI 30,4±3,1 kg/m2), fick metformin 1250 mg tre gånger dagligen. Uppföljningstiden var 6 månader. Kontrollgruppen bestod av 10 friska kvinnliga frivilliga, som var åldersmatchade.

Metoder:

Eftersom alla PCOS-kvinnor var anovulatoriska genomgick de ett progesteronprovokationstest (100 mg naturligt progesteron i.m.; Prontogest, Amsa, Rom, Italien), vilket inducerade livmoderblödning hos alla PCOS-kvinnor. För att utesluta förekomsten av typ 2-diabetes eller onormal glukostolerans utfördes det orala glukostoleranstestet (OGTT) och det normala glukossvaret på OGTT definierades enligt 'Report of the Expert Committee on the diagnose and classification of diabetes mellitus' '.

Alla antropometriska mätningar gjordes med försökspersoner som endast bar lätta kläder och utan skor. Hos varje kvinna mättes vikt och längd för att beräkna BMI [vikt (kg) dividerat med höjd i kvadrat (m2), kg/m2]. Höjd mättes till närmaste cm med hjälp av en väggmonterad stadiometer. Kroppsvikten (BW) bestämdes till närmaste 50 g med användning av en kalibrerad balansstråleskala.

Patienterna fick en standardiserad intervju för att få information om varaktigheten av fetma, matmönster, rökvanor och fysisk träning. I synnerhet ombads försökspersonerna också att göra en daglig registrering av mängden fysisk aktivitet (ingen träning; ≤2-3 timmar/vecka; ≥2-3 timmar/vecka). Intag av föda före tillträde och kosthistoria utvärderades av en skicklig dietist som använde en datorstödd intervju (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italien). Alla PCOS-kvinnor fick en normokaloridiet.

Analyser:

Blodprov togs mellan 08.00 och 09.00 från en antecubital ven efter en natts fasta, med patienten i viloställning. OGTT utfördes med användning av 75 g dextros. Blodprov togs vid 0, 30, 60, 90, 120 minuter för plasmaglukos- och insulinmätningar. Fastande plasmaglukosnivåer (FPG) bestämdes med glukosoxidasmetoden omedelbart efter OGTT. Fastande plasmainsulin (FPI) prover centrifugerades omedelbart, plasma separerades och lagrades vid -20°C fram till analys. FPI mättes med en fastfas kemiluminescerande enzymimmunanalys med användning av kommersiellt tillgängliga kit (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI och ISI beräknades.

PED/PEA-15-protein mättes i lysat av vita blodkroppar (WBC) erhållna från 10 till 12 ml nyuppsamlat okoagulerat helblod, efter separation med dextran 6 %, med hjälp av Western blot-analys. För Western blot-analys solubiliserades WBC vid 4°C i TAT-buffert, centrifugerades vid 500 g under 20 minuter, och supernatantfraktioner lagrades vid -20°C tills de användes. Mängden 50 μg lysatproteiner värmdes till 100°C i Laemmli-buffert. Proteiner separerades med 15 % SDS-PAGE och överfördes sedan till 0-45 mm Immobilon-P-membran (Millipore, Bedfort, MA). Filter undersöktes med PED/PEA-15-antiserum vid 1:2000 utspädning, avslöjades genom förstärkt kemiluminescens och autoradiografi. Proteinbanden kvantifierades med laserdensitometri och uttrycktes som procent av pixlar (godtyckliga enheter).