Белок PED/PEA-15, СПКЯ, ожирение, индексы чувствительности к инсулину, метформин, оральные контрацептивы

Предметы:

Двадцать женщин с СПКЯ с ожирением (возраст: 24,7 ± 18 лет; ИМТ: 30 ± 2,4 кг/м2) были последовательно госпитализированы в отделение эндокринологии отделения молекулярной и клинической эндокринологии и онкологии Неаполитанского университета имени Федерико II. это клиническое исследование. Диагноз СПКЯ был поставлен в соответствии с диагностическими критериями СПКЯ. При включении в исследование пациенты были рандомизированы в две группы лечения в зависимости от чувствительности к инсулину. Группа OCP, 10 пациентов (ИМТ 29,7±1,5 кг/м2) получали 30 мкг этинилэстрадиола плюс 30 мг дроспиренона 21 день/мес. Группа МЕТ, 10 пациентов (ИМТ 30,4±3,1 кг/м2), получали метформин по 1250 мг 3 раза в сутки. Длительность наблюдения составила 6 месяцев. Контрольную группу составили 10 здоровых женщин-добровольцев, сопоставимых по возрасту.

Методы:

Поскольку у всех женщин с СПКЯ была ановуляция, им был проведен провокационный тест прогестерона (100 мг натурального прогестерона внутримышечно; Prontogest, Amsa, Рим, Италия), который вызвал маточное кровотечение у всех женщин с СПКЯ. Для исключения наличия сахарного диабета 2 типа или аномальной толерантности к глюкозе проводили пероральный тест на толерантность к глюкозе (ОГТТ) и определяли нормальную реакцию глюкозы на ПГТТ в соответствии с «Отчетом Экспертной комиссии по диагностике и классификации сахарного диабета». '.

Все антропометрические измерения проводились у испытуемых в легкой одежде и без обуви. У каждой женщины измеряли вес и рост для расчета ИМТ [вес (кг), деленный на квадрат роста (м2), кг/м2]. Рост измеряли с точностью до сантиметра с помощью настенного ростомера. Массу тела (МТ) определяли с точностью до 50 г с помощью калиброванных весов.

Пациентам было предложено стандартизированное интервью для получения информации о продолжительности ожирения, режиме питания, привычках курения и физических упражнениях. В частности, испытуемых также просили ежедневно записывать объем физической активности (без упражнений; ≤2-3 часа в неделю; ≥2-3 часа в неделю). Потребление пищи до госпитализации и диетический анамнез оценивались квалифицированным врачом-диетологом, который использовал компьютерное интервью (Winfood 1.5, Medimatica srl, Мартинсикуро, Италия). Все женщины с СПКЯ получали нормокалорийную диету.

Анализы:

Образцы крови были получены между 08:00 и 09:00 из локтевой вены после ночного голодания, в положении пациента в состоянии покоя. ПГТТ проводили с использованием 75 г декстрозы. Образцы крови были получены на 0, 30, 60, 90, 120 мин для измерения уровня глюкозы и инсулина в плазме. Уровни глюкозы в плазме натощак (ГПН) определяли методом глюкозооксидазы сразу после ПГТТ. Образцы инсулина плазмы натощак (FPI) быстро центрифугировали, плазму отделяли и хранили при -20°C до анализа. FPI измеряли твердофазным хемилюминесцентным иммуноферментным анализом с использованием имеющихся в продаже наборов (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI и ISI.

Белок PED/PEA-15 измеряли в лизатах лейкоцитов (WBC), полученных из 10-12 мл свежесобранной некоагулированной цельной крови, после разделения с помощью 6% декстрана с использованием вестерн-блоттинга. Для вестерн-блоттинга лейкоциты солюбилизировали при 4°С в ТАТ-буфере, центрифугировали при 500g в течение 20 мин, а фракции супернатантов хранили при -20°С до использования. В количестве 50 мкг лизат белков нагревали при 100°С в буфере Лэммли. Белки разделяли с помощью 15% SDS-PAGE и затем переносили на мембраны Immobilon-P размером 0•45 мм (Millipore, Bedfort, MA). Фильтры зондировали антисывороткой PED/PEA-15 в разведении 1:2000, что выявляли с помощью усиленной хемилюминесценции и авторадиографии. Белковые полосы количественно определяли с помощью лазерной денситометрии и выражали в процентах от пикселей (условные единицы).