PED/PEA-15-proteiini, PCOS, liikalihavuus, insuliiniherkkyysindeksit, metformiini, suun kautta otettavat ehkäisyvalmisteet

Aiheet:

Kaksikymmentä lihavaa PCOS-naista (ikä: 24,7 ± 18 vuotta; BMI: 30 ± 2,4 kg/m2) hyväksyttiin peräkkäin Napolin Federico II -yliopiston molekyyli- ja kliinisen endokrinologian ja onkologian laitoksen endokrinologian yksikköön. tämä kliininen tutkimus. PCOS-diagnoosi tehtiin PCOS:n diagnostisten kriteerien mukaisesti Tutkimukseen tullessa potilaat satunnaistettiin kahteen hoitoryhmään insuliiniherkkyyden mukaan. OCP-ryhmässä 10 potilasta (BMI 29,7 ± 1,5 kg/m2) sai 30 µg etinyyliestradiolia plus 30 mg drospirenonia 21 päivää/kuukausi. MET-ryhmä, 10 potilasta (BMI 30,4±3,1 kg/m2), sai metformiinia 1250 mg kolme kertaa päivässä. Seurannan kesto oli 6 kuukautta. Kontrolliryhmä koostui 10 terveestä naispuolisesta vapaaehtoisesta, jotka olivat iältään yhteensopivat.

Menetelmät:

Koska kaikki PCOS-naiset olivat anovulatorisia, heille tehtiin progesteronialtistustesti (100 mg luonnollista progesteronia i.m.; Prontogest, Amsa, Rooma, Italia), joka aiheutti kohdun verenvuotoa kaikilla PCOS-naisilla. Tyypin 2 diabeteksen tai epänormaalin glukoositoleranssin poissulkemiseksi suoritettiin oraalinen glukoositoleranssitesti (OGTT) ja normaali glukoosivaste OGTT:lle määritettiin diabeteksen diagnosointia ja luokittelua käsittelevän asiantuntijakomitean raportin mukaisesti. '.

Kaikki antropometriset mittaukset tehtiin koehenkilöillä, joilla oli vain kevyitä vaatteita ja ilman kenkiä. Jokaiselta naiselta mitattiin paino ja pituus BMI:n laskemiseksi [paino (kg) jaettuna pituuden neliöllä (m2), kg/m2]. Korkeus mitattiin lähimpään senttimetriin seinään asennettavalla stadionimittarilla. Kehon paino (BW) määritettiin 50 g:n tarkkuudella käyttämällä kalibroitua tasapainokeila-asteikkoa.

Potilaille annettiin standardoitu haastattelu saadakseen tietoa liikalihavuuden kestosta, ruokailutottumuksista, tupakointitottumuksista ja fyysisestä harjoituksesta. Erityisesti koehenkilöitä pyydettiin myös kirjaamaan päivittäin fyysisen aktiivisuuden määrä (ei liikuntaa; ≤2-3 h/viikko; ≥2-3 h/viikko). Ammattitaitoinen ravitsemusterapeutti arvioi ennen pääsyä syömisen ja ruokailuhistorian tietokoneavusteisessa haastattelussa (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Italia). Kaikki PCOS-naiset saivat normokalorisen ruokavalion.

Määritykset:

Verinäytteet otettiin klo 08.00-09.00 välillä kyynärpäälaskimosta yön yli paaston jälkeen potilaan ollessa lepoasennossa. OGTT suoritettiin käyttämällä 75 g dekstroosia. Verinäytteet otettiin 0, 30, 60, 90, 120 min plasman glukoosi- ja insuliinimittauksia varten. Plasman paastoglukoositasot (FPG) määritettiin glukoosioksidaasimenetelmällä välittömästi OGTT:n jälkeen. Paastoplasma-insuliini (FPI) -näytteet sentrifugoitiin välittömästi, plasma erotettiin ja säilytettiin -20 °C:ssa määritykseen asti. FPI mitattiin kiinteän faasin kemiluminesenssientsyymi-immunomäärityksellä käyttäen kaupallisesti saatavia kittejä (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI ja ISI laskettiin.

PED/PEA-15-proteiini mitattiin valkosolujen (WBC) lysaateista, jotka saatiin 10 - 12 ml:sta juuri kerättyä hyytymätöntä kokoverta 6 %:n dekstraanilla erotuksen jälkeen käyttämällä Western blot -analyysiä. Western blot -analyysiä varten WBC:t liuotettiin 4 °C:ssa TAT-puskuriin, sentrifugoitiin 500 g:ssä 20 minuuttia ja supernatanttifraktioita säilytettiin -20 °C:ssa käyttöön asti. 50 µg lysaattiproteiineja kuumennettiin 100 °C:ssa Laemmli-puskurissa. Proteiinit erotettiin 15 % SDS-PAGE:lla ja siirrettiin sitten 0-45 mm Immobilon-P-kalvoille (Millipore, Bedfort, MA). Suodattimet tutkittiin PED/PEA-15-antiseerumilla 1:2000 laimennoksella, mikä paljastui parannetulla kemiluminesenssilla ja autoradiografialla. Proteiinivyöhykkeet kvantifioitiin laserdensitometrialla ja ilmaistiin prosentteina pikseleistä (satunnaiset yksiköt).