PED/PEA-15 Białko, PCOS, Otyłość, Wskaźniki wrażliwości na insulinę, Metformina, Doustne środki antykoncepcyjne

Przedmioty:

Dwadzieścia otyłych kobiet z PCOS (wiek: 24,7±18 lat; BMI: 30±2,4 kg/m2) zostało kolejno przyjętych do Oddziału Endokrynologii Kliniki Endokrynologii Molekularnej i Klinicznej oraz Onkologii Uniwersytetu im. to badanie kliniczne. Rozpoznanie PCOS postawiono zgodnie z kryteriami diagnostycznymi PCOS. Na początku badania pacjentki zostały losowo przydzielone do dwóch grup leczenia, w zależności od wrażliwości na insulinę. Grupa OCP, 10 pacjentów (BMI 29,7± 1,5 kg/m2) otrzymywała 30 µg etynyloestradiolu plus 30 mg drospirenonu 21 dzień/miesiąc. Grupa MET, 10 pacjentów (BMI 30,4± 3,1 kg/m2), otrzymywała metforminę w dawce 1250 mg trzy razy dziennie. Czas obserwacji wynosił 6 miesięcy. Grupa kontrolna składała się z 10 zdrowych ochotniczek w tym samym wieku.

Metody:

Ponieważ wszystkie kobiety z PCOS nie miały owulacji, przeszły test progesteronowy (100 mg naturalnego progesteronu i.m.; Prontogest, Amsa, Rzym, Włochy), który wywołał krwawienie z macicy u wszystkich kobiet z PCOS. W celu wykluczenia obecności cukrzycy typu 2 lub nieprawidłowej tolerancji glukozy wykonano doustny test obciążenia glukozą (OGTT) i określono prawidłową odpowiedź glukozy na OGTT zgodnie z „Raportem Komitetu Ekspertów ds. Rozpoznawania i Klasyfikacji Cukrzycy '.

Wszystkie pomiary antropometryczne zostały wykonane na osobach ubranych tylko w lekkie ubrania i bez butów. U każdej kobiety zmierzono wagę i wzrost w celu obliczenia BMI [waga (kg) podzielona przez wzrost do kwadratu (m2), kg/m2]. Wysokość mierzono z dokładnością do cm za pomocą stadiometru zamontowanego na ścianie. Masę ciała (BW) określono z dokładnością do 50 g, stosując skalibrowaną wagę z równoważnią.

Pacjenci zostali poddani wystandaryzowanemu wywiadowi w celu uzyskania informacji na temat czasu trwania otyłości, nawyków żywieniowych, nawyków związanych z paleniem i aktywności fizycznej. W szczególności poproszono badanych o codzienne zapisywanie ilości aktywności fizycznej (brak ćwiczeń; ≤2-3 godz./tydzień; ≥2-3 godz./tydzień). Spożycie pokarmu przed przyjęciem do szpitala i wywiad żywieniowy zostały ocenione przez wykwalifikowanego dietetyka, który wykorzystał wywiad wspomagany komputerowo (Winfood 1.5, Medimatica srl, Martinsicuro, Włochy). Wszystkie kobiety z PCOS otrzymywały dietę normokaloryczną.

Testy:

Próbki krwi pobierano między godziną 08.00 a 09.00 z żyły łokciowej po całonocnym poście, w pozycji spoczynkowej pacjenta. OGTT przeprowadzono stosując 75 g dekstrozy. Próbki krwi pobierano w 0, 30, 60, 90, 120 minucie do pomiarów glukozy i insuliny w osoczu. Stężenia glukozy w osoczu na czczo (FPG) oznaczano metodą oksydazy glukozowej bezpośrednio po OGTT. Próbki insuliny w osoczu na czczo (FPI) natychmiast odwirowano, osocze oddzielono i przechowywano w temperaturze -20°C do czasu oznaczenia. FPI mierzono za pomocą enzymatycznego testu immunologicznego chemiluminescencyjnego w fazie stałej, stosując dostępne w handlu zestawy (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA). 1/HOMA-IR, QUICKI i ISI zostały obliczone.

Białko PED/PEA-15 oznaczano w lizatach krwinek białych (WBC) uzyskanych z 10 do 12 ml świeżo pobranej nieskoagulowanej krwi pełnej, po oddzieleniu dekstranem 6%, metodą analizy Western blot. Do analizy Western blot WBC rozpuszczano w 4°C w buforze TAT, wirowano przy 500 g przez 20 min, a frakcje supernatantu przechowywano w -20°C do użycia. Ilość 50 μg białek lizatu ogrzewano w 100°C w buforze Laemmli. Białka rozdzielono za pomocą 15% SDS-PAGE, a następnie przeniesiono na 0•45-mm membrany Immobilon-P (Millipore, Bedfort, MA). Filtry sondowano z antysurowicą PED/PEA-15 w rozcieńczeniu 1:2000, co wykazano przez wzmocnioną chemiluminescencję i autoradiografię. Prążki białkowe oznaczono ilościowo za pomocą densytometrii laserowej i wyrażono jako procent pikseli (jednostki arbitralne).