循環胎児細胞の遺伝子解析による 21 トリソミーの非侵襲的出生前診断 (ISETTRI21)

研究者は、次のアプローチを計画および開発しました: 胎児細胞は、ISET (上皮腫瘍細胞のサイズによる分離) 技術を使用して、妊娠 7 ～ 12 週の妊婦の血液から最初に濃縮されます。 胎児起源であると推定される細胞を顕微解剖し、続いてSTRマーカーを使用して遺伝子分析を行い、胎児の性質を確認します。 研究者は、21 番染色体のコピー数を評価するために 2 つの戦略をテストする予定です。 最初のものは、CGH（比較ゲノムハイブリダイゼーション）アレイで分析される単一の胎児細胞のDNAを含みます。 実際、私たちのチームは、ISET によって分離された単一細胞への中期 CGH 法の適用を既に開発しており、ダウン症の胎児の臍帯血から分離された単一胎児細胞で 21 番染色体 DNA の増加を実証することができました。 2 番目の戦略は、単一細胞に適用される短いタンデム リピート (STR) の定量的蛍光 PCR 分析を使用して達成されます。 染色体 21 に特異的な少なくとも 5 ～ 8 個の高度に多型の STR マーカーをテストして、1 つの対立遺伝子が増幅に失敗する対立遺伝子ドロップアウトと呼ばれる現象の影響を最小限に抑え、ダイソミーの正確な診断のためにトライアレルシグナルの数を最大化します。または21トリソミー。

この調査は、クラマールのアントワーヌ ベクレル病院の婦人科産科 - 生殖医療部門と協力して実施されます。 調査に含まれる女性は、侵襲的検査 (羊水穿刺) の前に 20 ml の血液サンプルと子宮頸部パップスメアを採取されます。 血液サンプルは採取後3時間以内にISET法で処理され、フィルターは-20°Cで保存されます。 パップスメアによって得られた細胞は、適切な液体に保存され、ネッカー病院の生化学実験室でISET法によって処理されます。 ２１トリソミーのＮＩ－ＰＮＤについて栄養膜細胞に向けられた分子分析は、盲検研究で実施される。

扇動者は、21 トリソミーの 100 例と正常な核型を持つ 300 の対照例を含む盲検研究で ISET 法を使用することを計画しました。 この研究では、感度が 97 % を超え、特異性が 99 % を超える結果を得ることができます (IC 95 % [70-100])。 盲検試験を開始し、侵襲的方法（羊水穿刺）と非侵襲的方法で得られた結果を比較することにより、検証が行われます。