Ikke-invasiv prenatal diagnose av trisomi 21 ved genetisk analyse av sirkulerende fosterceller (ISETTRI21)

Etterforskerne har planlagt og utviklet følgende tilnærming: Fosterceller blir først anriket fra blod fra gravide kvinner, mellom 7 og 12 ukers svangerskap, ved å bruke ISET-teknikken (isolering etter størrelse på epiteltumorceller). Celler som antas å være av føtal opprinnelse blir mikrodissekert og deretter genetisk analysert, ved hjelp av STR-markører, for å verifisere deres føtale natur. Etterforskerne planlegger deretter å teste to strategier for å vurdere antall kopier av kromosom 21. Den første involverer DNA fra en enkelt føtal celle som skal analyseres med CGH (komparativ genomisk hybridisering) array. Faktisk har teamet vårt allerede utviklet en applikasjon av metafase CGH-metoden til enkeltceller isolert av ISET, der vi var i stand til å demonstrere gevinsten av kromosom 21-DNA i enkeltfosterceller isolert fra navlestrengsblod fra et foster med Downs syndrom. Den andre strategien vil bli oppnådd ved bruk av kvantitativ fluorescerende PCR-analyse av korte tandem-repetisjoner (STR), brukt på enkeltceller. Minst 5-8 svært polymorfe STR-markører spesifikke for kromosom 21 vil bli testet for å minimere effekten av et fenomen kalt allel drop-out, der en allel ikke klarer å forsterke, og for å maksimere antall trialleliske signaler for en nøyaktig diagnose av disomi. eller trisomi 21.

Denne undersøkelsen er utført i samarbeid med Institutt for gynekologi-obstetrikk - reproduksjonsmedisin ved Antoine Béclère sykehus i Clamart. Kvinnene som er inkludert i undersøkelsen vil bli tatt en 20 ml blodprøve og en celleprøve fra livmorhalsen før den invasive testen (amniocentese). Blodprøven vil bli behandlet med ISET-metoden innen 3 timer etter innsamling og filteret vil bli lagret ved -20°C. Cellene oppnådd ved celleprøver vil bli oppbevart i en passende væske og deretter behandlet med ISET-metoden i Biochemistry Laboratory of Necker Hospital. De molekylære analysene rettet mot trofoblastiske celler for NI-PND av Trisomi 21 vil bli utført i en blind studie.

Pådriverne har planlagt å bruke ISET-metoden i en blind studie som inkluderer 100 tilfeller av trisomi 21 og 300 kontrolltilfeller med normal karyotype. Denne studien vil gjøre det mulig å oppnå resultater med sensitivitet høyere enn 97 % og spesifisitet høyere enn 99 % (IC 95 % [70-100]). Valideringen vil bli oppnådd ved åpning av den blinde studien og sammenligning av resultater oppnådd ved den invasive metoden (amniocentese) og den ikke-invasive metoden.