Неинвазивная пренатальная диагностика трисомии 21 с помощью генетического анализа циркулирующих клеток плода (ISETTRI21)

Исследователи спланировали и разработали следующий подход: фетальные клетки сначала обогащают из крови беременных женщин между 7 и 12 неделями гестации, используя методику ISET (выделение по размеру эпителиальных опухолевых клеток). Клетки, предположительно плодного происхождения, микрорассекают и затем подвергают генетическому анализу с использованием STR-маркеров, чтобы подтвердить их фетальную природу. Затем исследователи планируют протестировать две стратегии, чтобы оценить количество копий 21-й хромосомы. Первый включает анализ ДНК одной фетальной клетки с помощью массива CGH (сравнительная геномная гибридизация). Фактически, наша команда уже разработала применение метода метафазного CGH к отдельным клеткам, выделенным с помощью ISET, в котором мы смогли продемонстрировать увеличение ДНК хромосомы 21 в одиночных клетках плода, выделенных из пуповинной крови плода с синдромом Дауна. Вторая стратегия будет реализована с использованием количественного флуоресцентного ПЦР-анализа коротких тандемных повторов (STR), применяемых к одиночным клеткам. Будет протестировано не менее 5–8 высокополиморфных STR-маркеров, специфичных для хромосомы 21, чтобы свести к минимуму последствия явления, называемого выпадением аллеля, при котором один аллель не амплифицируется, и максимизировать количество триаллельных сигналов для точного диагноза дисомии. или трисомия 21.

Это обследование проводится в сотрудничестве с отделением гинекологии-акушерства и репродуктивной медицины больницы Антуана Беклера в Кламаре. У женщин, включенных в исследование, перед инвазивным тестом (амниоцентезом) возьмут 20 мл крови и мазок из шейки матки. Образец крови будет обработан методом ISET в течение 3 часов после забора, а фильтр будет храниться при температуре -20°C. Клетки, полученные с помощью мазка Папаниколау, будут храниться в соответствующей жидкости, а затем обрабатываться методом ISET в биохимической лаборатории больницы Неккер. Молекулярные анализы, направленные на трофобластические клетки для NI-PND трисомии 21, будут проводиться в слепом исследовании.

Инициаторы планировали использовать метод ISET в слепом исследовании, включающем 100 случаев трисомии 21 и 300 контрольных случаев с нормальным кариотипом. Это исследование позволит получить результаты с чувствительностью выше 97 % и специфичностью выше 99 % (IC 95 % [70-100]). Валидация будет получена путем открытия слепого исследования и сравнения результатов, полученных инвазивным методом (амниоцентез) и неинвазивным методом.