Diagnostic prénatal non invasif de la trisomie 21 par analyse génétique des cellules fœtales circulantes (ISETTRI21)

Les chercheurs ont prévu et développé l'approche suivante : les cellules fœtales sont d'abord enrichies à partir de sang de femmes enceintes, entre 7 et 12 semaines de gestation, en utilisant la technique ISET (isolement par taille des cellules tumorales épithéliales). Les cellules présumées d'origine fœtale sont microdisséquées puis analysées génétiquement, à l'aide de marqueurs STR, pour vérifier leur nature fœtale. Les chercheurs envisagent alors de tester deux stratégies afin d'évaluer le nombre de copies du chromosome 21. Le premier implique l'ADN d'une seule cellule fœtale à analyser avec un réseau CGH (hybridation génomique comparative). En effet, notre équipe a déjà développé une application de la méthode CGH en métaphase à des cellules individuelles isolées par ISET dans laquelle nous avons pu démontrer le gain d'ADN du chromosome 21 dans des cellules fœtales individuelles isolées du sang de cordon d'un fœtus trisomique. La deuxième stratégie sera accomplie avec l'utilisation de l'analyse quantitative par PCR fluorescente de courtes répétitions en tandem (STR), appliquée à des cellules individuelles. Au moins 5 à 8 marqueurs STR hautement polymorphes spécifiques du chromosome 21 seront testés pour minimiser les effets d'un phénomène appelé abandon d'allèle, dans lequel un allèle ne parvient pas à s'amplifier, et pour maximiser le nombre de signaux trialléliques pour un diagnostic précis de la disomie ou trisomie 21.

Cette enquête est réalisée en collaboration avec le Service de Gynécologie-Obstétrique - Médecine de la Reproduction de l'Hôpital Antoine Béclère de Clamart. Les femmes incluses dans l'enquête recevront un échantillon de sang de 20 ml et un frottis cervical avant le test invasif (amniocentèse). L'échantillon sanguin sera traité par la méthode ISET dans les 3 heures suivant le prélèvement et le filtre sera conservé à - 20°C. Les cellules obtenues par frottis seront conservées dans un liquide approprié puis traitées par la méthode ISET au Laboratoire de Biochimie de l'Hôpital Necker. Les analyses moléculaires dirigées vers les cellules trophoblastiques pour le NI-PND de Trisomie 21 seront réalisées dans une étude en aveugle.

Les instigateurs ont prévu d'utiliser la méthode ISET dans une étude en aveugle incluant 100 cas de trisomie 21 et 300 cas témoins à caryotype normal. Cette étude permettra d'obtenir des résultats avec une sensibilité supérieure à 97 % et une spécificité supérieure à 99 % (IC 95 % [70-100]). La validation sera obtenue par l'ouverture de l'étude en aveugle et la comparaison des résultats obtenus par la méthode invasive (amniocentèse) et la méthode non invasive.