Nieinwazyjna diagnostyka prenatalna trisomii 21 na podstawie analizy genetycznej krążących komórek płodowych (ISETTRI21)

Badacze zaplanowali i opracowali następujące podejście: komórki płodowe są najpierw wzbogacane z krwi kobiet ciężarnych między 7 a 12 tygodniem ciąży, przy użyciu techniki ISET (izolacja według rozmiaru komórek nowotworowych nabłonka). Komórki, co do których przypuszcza się, że są pochodzenia płodowego, poddaje się mikrodysekcji, a następnie analizie genetycznej przy użyciu markerów STR w celu zweryfikowania ich płodowej natury. Badacze planują następnie przetestować dwie strategie w celu oceny liczby kopii chromosomu 21. Pierwszy polega na analizie DNA pojedynczej komórki płodowej za pomocą macierzy CGH (comparative genomic hybridization). W rzeczywistości nasz zespół opracował już zastosowanie metody metafazy CGH do pojedynczych komórek izolowanych za pomocą ISET, w którym byliśmy w stanie wykazać wzrost DNA chromosomu 21 w pojedynczych komórkach płodowych wyizolowanych z krwi pępowinowej płodu z zespołem Downa. Druga strategia zostanie zrealizowana z wykorzystaniem ilościowej analizy fluorescencyjnej reakcji PCR krótkich powtórzeń tandemowych (STR), zastosowanych do pojedynczych komórek. Co najmniej 5-8 wysoce polimorficznych markerów STR specyficznych dla chromosomu 21 zostanie przetestowanych, aby zminimalizować skutki zjawiska zwanego wypadnięciem allelu, w którym jeden allel nie ulega amplifikacji, oraz aby zmaksymalizować liczbę sygnałów trialelowych dla dokładnej diagnozy disomii lub trisomii 21.

Niniejsze badanie jest przeprowadzane we współpracy z Oddziałem Ginekologiczno-Położniczym – Medycyny Rozrodu Szpitala Antoine Béclère w Clamart. U kobiet objętych badaniem zostanie pobrana 20 ml krwi oraz wymaz cytologiczny przed badaniem inwazyjnym (amniopunkcja). Próbka krwi zostanie poddana obróbce metodą ISET w ciągu 3 godzin po pobraniu, a filtr będzie przechowywany w temperaturze -20°C. Komórki uzyskane z wymazu Pap będą przechowywane w odpowiednim płynie, a następnie traktowane metodą ISET w Laboratorium Biochemicznym Szpitala Necker. Analizy molekularne skierowane do komórek trofoblastycznych pod kątem NI-PND trisomii 21 zostaną przeprowadzone w ślepym badaniu.

Inicjatorzy zaplanowali zastosowanie metody ISET w ślepym badaniu obejmującym 100 przypadków trisomii 21 i 300 przypadków kontrolnych z prawidłowym kariotypem. Badanie to pozwoli na uzyskanie wyników o czułości wyższej niż 97% i swoistości wyższej niż 99% (IC 95% [70-100]). Walidacja zostanie uzyskana poprzez otwarcie ślepego badania i porównanie wyników uzyskanych metodą inwazyjną (amniopunkcja) i metodą nieinwazyjną.