Nicht-invasive pränatale Diagnose von Trisomie 21 durch genetische Analyse zirkulierender fötaler Zellen (ISETTRI21)

Die Forscher haben den folgenden Ansatz geplant und entwickelt: Fetale Zellen werden zunächst aus dem Blut von schwangeren Frauen zwischen der 7. und 12. Schwangerschaftswoche angereichert, wobei die ISET-Technik (Isolation by Size of Epithelial Tumor Cells) angewendet wird. Zellen, von denen angenommen wird, dass sie fötalen Ursprungs sind, werden mikrodisseziert und anschließend unter Verwendung von STR-Markern genetisch analysiert, um ihre fötale Natur zu bestätigen. Die Forscher planen dann, zwei Strategien zu testen, um die Anzahl der Kopien von Chromosom 21 zu bestimmen. Der erste beinhaltet die DNA einer einzelnen fötalen Zelle, die mit einem CGH-Array (comparative genomic hybridization) analysiert werden soll. Tatsächlich hat unser Team bereits eine Anwendung der Metaphase-CGH-Methode auf einzelne Zellen entwickelt, die durch ISET isoliert wurden, in der wir in der Lage waren, den Gewinn von Chromosom-21-DNA in einzelnen fötalen Zellen zu demonstrieren, die aus Nabelschnurblut eines Fötus mit Down-Syndrom isoliert wurden. Die zweite Strategie wird durch die Verwendung einer quantitativen Fluoreszenz-PCR-Analyse von kurzen Tandem-Wiederholungen (STRs) erreicht, die auf einzelne Zellen angewendet werden. Mindestens 5-8 hochgradig polymorphe STR-Marker, die für Chromosom 21 spezifisch sind, werden getestet, um die Auswirkungen eines Phänomens namens Allel-Drop-out zu minimieren, bei dem ein Allel nicht amplifiziert wird, und um die Anzahl der Triallel-Signale für eine genaue Diagnose der Disomie zu maximieren oder Trisomie 21.

Diese Umfrage wird in Zusammenarbeit mit der Abteilung für Gynäkologie-Geburtshilfe - Reproduktionsmedizin des Krankenhauses Antoine Béclère in Clamart durchgeführt. Den in die Befragung eingeschlossenen Frauen wird vor dem invasiven Test (Amniozentese) eine 20-ml-Blutprobe und ein Zervix-Pap-Abstrich entnommen. Die Blutprobe wird innerhalb von 3 Stunden nach der Entnahme mit der ISET-Methode behandelt und der Filter bei -20 °C gelagert. Die durch den Pap-Abstrich gewonnenen Zellen werden in einer geeigneten Flüssigkeit aufbewahrt und dann mit der ISET-Methode im Biochemie-Labor des Necker-Krankenhauses behandelt. Die molekularen Analysen, die auf die trophoblastischen Zellen für die NI-PND von Trisomie 21 gerichtet sind, werden in einer Blindstudie durchgeführt.

Die Initiatoren haben geplant, die ISET-Methode in einer Blindstudie mit 100 Fällen von Trisomie 21 und 300 Kontrollfällen mit normalem Karyotyp einzusetzen. Diese Studie ermöglicht Ergebnisse mit einer Sensitivität von über 97 % und einer Spezifität von über 99 % (IC 95 % [70-100]). Die Validierung erfolgt durch die Eröffnung der Blindstudie und den Vergleich der Ergebnisse der invasiven Methode (Amniozentese) und der nicht-invasiven Methode.