Diagnóstico pré-natal não invasivo de trissomia 21 por análise genética de células fetais circulantes (ISETTRI21)

Os investigadores planejaram e desenvolveram a seguinte abordagem: células fetais são primeiro enriquecidas com sangue de mulheres grávidas, entre 7 e 12 semanas de gestação, empregando a técnica ISET (isolamento por tamanho de células tumorais epiteliais). As células supostamente de origem fetal são microdissecadas e posteriormente analisadas geneticamente, usando marcadores STR, para verificar sua natureza fetal. Os pesquisadores planejam então testar duas estratégias para avaliar o número de cópias do cromossomo 21. A primeira envolve o DNA de uma única célula fetal a ser analisada com matriz CGH (hibridização genômica comparativa). De fato, nossa equipe já desenvolveu uma aplicação do método metafásico CGH a células isoladas por ISET, na qual conseguimos demonstrar o ganho de DNA do cromossomo 21 em células fetais isoladas do sangue do cordão umbilical de um feto com síndrome de Down. A segunda estratégia será realizada com o uso de PCR fluorescente quantitativo de repetições curtas em tandem (STRs), aplicadas a células individuais. Pelo menos 5-8 marcadores STR altamente polimórficos específicos para o cromossomo 21 serão testados para minimizar os efeitos de um fenômeno chamado queda de alelo, no qual um alelo falha na amplificação, e para maximizar o número de sinais trialélicos para um diagnóstico preciso de dissomia ou trissomia 21.

Esta pesquisa é realizada em colaboração com o Departamento de Ginecologia-Obstetrícia - Medicina Reprodutiva do Hospital Antoine Béclère em Clamart. As mulheres incluídas na pesquisa serão coletadas uma amostra de sangue de 20 ml e um exame de Papanicolaou cervical antes do teste invasivo (amniocentese). A amostra de sangue será tratada pelo método ISET em até 3 horas após a coleta e o filtro será armazenado a - 20°C. As células obtidas pelo Papanicolaou serão mantidas em líquido apropriado e posteriormente tratadas pelo método ISET no Laboratório de Bioquímica do Hospital Necker. As análises moleculares direcionadas às células trofoblásticas para o NI-PND da Trissomia 21 serão realizadas em estudo cego.

Os instigadores planejaram usar o método ISET em um estudo cego incluindo 100 casos de trissomia 21 e 300 casos de controle com cariótipo normal. Este estudo permitirá obter resultados com sensibilidade superior a 97 % e especificidade superior a 99 % (IC 95 % [70-100]). A validação será obtida pela abertura do estudo cego e pela comparação dos resultados obtidos pelo método invasivo (amniocentese) e pelo método não invasivo.