Diagnosi prenatale non invasiva della trisomia 21 mediante analisi genetica delle cellule fetali circolanti (ISETTRI21)

I ricercatori hanno pianificato e sviluppato il seguente approccio: le cellule fetali vengono prima arricchite dal sangue di donne in gravidanza, tra le 7 e le 12 settimane di gestazione, impiegando la tecnica ISET (isolamento per dimensione delle cellule tumorali epiteliali). Le cellule presunte di origine fetale vengono microdissezionate e successivamente analizzate geneticamente, utilizzando marcatori STR, per verificarne la natura fetale. Gli investigatori pianificano quindi di testare due strategie per valutare il numero di copie del cromosoma 21. Il primo riguarda il DNA di una singola cellula fetale da analizzare con l'array CGH (comparative genomic hybridization). Infatti, il nostro team ha già sviluppato un'applicazione del metodo CGH in metafase a singole cellule isolate da ISET in cui siamo stati in grado di dimostrare il guadagno di DNA del cromosoma 21 in singole cellule fetali isolate dal sangue del cordone ombelicale di un feto con sindrome di Down. La seconda strategia sarà realizzata con l'uso dell'analisi PCR fluorescente quantitativa di brevi ripetizioni in tandem (STR), applicata a singole cellule. Saranno testati almeno 5-8 marcatori STR altamente polimorfici specifici per il cromosoma 21 per minimizzare gli effetti di un fenomeno chiamato allele drop out, in cui un allele non riesce ad amplificarsi, e per massimizzare il numero di segnali triallelici per un'accurata diagnosi di disomia o trisomia 21.

Questa indagine è realizzata in collaborazione con il Dipartimento di Ginecologia-Ostetricia - Medicina della Riproduzione dell'Ospedale Antoine Béclère di Clamart. Alle donne incluse nel sondaggio verrà prelevato un campione di sangue di 20 ml e un Pap test cervicale prima del test invasivo (amniocentesi). Il campione di sangue verrà trattato con il metodo ISET entro 3 ore dalla raccolta e il filtro verrà conservato a -20°C. Le cellule ottenute dal Pap test saranno conservate in un liquido appropriato e poi trattate con il metodo ISET nel Laboratorio di Biochimica dell'Ospedale Necker. Le analisi molecolari dirette alle cellule trofoblastiche per la NI-PND della Trisomia 21 saranno eseguite in uno studio in cieco.

I promotori hanno pianificato di utilizzare il metodo ISET in uno studio in cieco comprendente 100 casi di trisomia 21 e 300 casi di controllo con cariotipo normale. Questo studio consentirà di ottenere risultati con sensibilità superiore al 97 % e specificità superiore al 99 % (IC 95 % [70-100]). La validazione sarà ottenuta mediante l'apertura dello studio in cieco e il confronto dei risultati ottenuti con il metodo invasivo (amniocentesi) e il metodo non invasivo.