Diagnóstico Prenatal No Invasivo de Trisomía 21 por Análisis Genético de Células Fetales Circulantes (ISETTRI21)

Los investigadores han planificado y desarrollado el siguiente enfoque: las células fetales se enriquecen primero a partir de sangre de mujeres embarazadas, entre las semanas 7 y 12 de gestación, empleando la técnica ISET (aislamiento por tamaño de células tumorales epiteliales). Las células que se supone que son de origen fetal se microdisectan y posteriormente se analizan genéticamente, utilizando marcadores STR, para verificar su naturaleza fetal. Luego, los investigadores planean probar dos estrategias para evaluar la cantidad de copias del cromosoma 21. El primero involucra el ADN de una sola célula fetal que se analizará con matriz CGH (hibridación genómica comparativa). De hecho, nuestro equipo ya ha desarrollado una aplicación del método CGH en metafase a células individuales aisladas por ISET en la que pudimos demostrar la ganancia de ADN del cromosoma 21 en células fetales individuales aisladas de la sangre del cordón umbilical de un feto con síndrome de Down. La segunda estrategia se logrará con el uso de análisis de PCR fluorescente cuantitativa de repeticiones cortas en tándem (STR), aplicadas a células individuales. Se probarán al menos 5-8 marcadores STR altamente polimórficos específicos para el cromosoma 21 para minimizar los efectos de un fenómeno llamado caída de alelo, en el que un alelo no se amplifica, y para maximizar la cantidad de señales trialélicas para un diagnóstico preciso de disomía. o trisomía 21.

Esta encuesta se realiza en colaboración con el Departamento de Ginecología-Obstetricia - Medicina Reproductiva del Hospital Antoine Béclère en Clamart. A las mujeres incluidas en la encuesta se les tomará una muestra de sangre de 20 ml y un Papanicolaou cervical antes de la prueba invasiva (amniocentesis). La muestra de sangre será tratada por el método ISET dentro de las 3 horas posteriores a la recolección y el filtro se almacenará a - 20°C. Las células obtenidas por Papanicolaou serán conservadas en un líquido apropiado y luego tratadas por el método ISET en el Laboratorio de Bioquímica del Hospital Necker. Los análisis moleculares dirigidos a las células trofoblásticas para el NI-PND de Trisomy 21 se realizarán en un estudio ciego.

Los promotores han planeado utilizar el método ISET en un estudio ciego que incluye 100 casos de trisomía 21 y 300 casos de control con cariotipo normal. Este estudio permitirá obtener resultados con una sensibilidad superior al 97 % y una especificidad superior al 99 % (IC 95 % [70-100]). La validación se obtendrá mediante la apertura del estudio ciego y la comparación de los resultados obtenidos por el método invasivo (amniocentesis) y el método no invasivo.