Icke-invasiv prenatal diagnos av trisomi 21 genom genetisk analys av cirkulerande fosterceller (ISETTRI21)

Utredarna har planerat och utvecklat följande tillvägagångssätt: fosterceller anrikas först från blod från gravida kvinnor, mellan 7 och 12 veckors graviditet, med hjälp av ISET-tekniken (isolering efter storlek på epiteltumörceller). Celler som antas vara av fosterursprung mikrodissekeras och analyseras sedan genetiskt, med användning av STR-markörer, för att verifiera deras fetala natur. Utredarna planerar sedan att testa två strategier för att bedöma antalet kopior av kromosom 21. Den första involverar DNA från en enda fetal cell som ska analyseras med CGH (jämförande genomisk hybridisering) array. Faktum är att vårt team redan har utvecklat en tillämpning av metafas-CGH-metoden på enstaka celler isolerade av ISET där vi kunde demonstrera vinsten av kromosom 21-DNA i enstaka fosterceller isolerade från navelsträngsblod från ett foster med Downs syndrom. Den andra strategin kommer att uppnås med användning av kvantitativ fluorescerande PCR-analys av korta tandemupprepningar (STR), applicerade på enstaka celler. Minst 5-8 högpolymorfa STR-markörer specifika för kromosom 21 kommer att testas för att minimera effekterna av ett fenomen som kallas allelbortfall, där en allel inte lyckas förstärka, och för att maximera antalet trialleliska signaler för en korrekt diagnos av disomi. eller trisomi 21.

Denna undersökning utförs i samarbete med avdelningen för gynekologi-obstetrik - reproduktionsmedicin vid Antoine Béclère-sjukhuset i Clamart. Kvinnorna som ingår i undersökningen kommer att ta ett 20 ml blodprov och ett cellprov från livmoderhalsen före det invasiva testet (amniocente). Blodprovet kommer att behandlas med ISET-metoden inom 3 timmar efter uppsamling och filtret kommer att förvaras vid -20°C. Cellerna som erhålls genom cellprov kommer att förvaras i en lämplig vätska och sedan behandlas med ISET-metoden i Biochemistry Laboratory of Necker Hospital. De molekylära analyserna riktade mot trofoblastiska celler för NI-PND av Trisomi 21 kommer att utföras i en blind studie.

Anstiftarna har planerat att använda ISET-metoden i en blind studie som inkluderar 100 fall av trisomi 21 och 300 kontrollfall med normal karyotyp. Denna studie kommer att göra det möjligt att erhålla resultat med känslighet högre än 97 % och specificitet högre än 99 % (IC 95 % [70-100]). Valideringen kommer att erhållas genom att den blinda studien öppnas och resultaten som erhålls med den invasiva metoden (amniocentesis) och den icke-invasiva metoden jämförs.