Niet-invasieve prenatale diagnose van trisomie 21 door genetische analyse van circulerende foetale cellen (ISETTRI21)

De onderzoekers hebben de volgende aanpak gepland en ontwikkeld: foetale cellen worden eerst verrijkt met bloed van zwangere vrouwen, tussen 7 en 12 weken zwangerschap, met behulp van de ISET-techniek (isolatie op grootte van epitheliale tumorcellen). Cellen waarvan wordt aangenomen dat ze van foetale oorsprong zijn, worden microdissected en vervolgens genetisch geanalyseerd, met behulp van STR-markers, om hun foetale aard te verifiëren. De onderzoekers zijn dan van plan om twee strategieën te testen om het aantal kopieën van chromosoom 21 te bepalen. De eerste omvat het DNA van een enkele foetale cel die moet worden geanalyseerd met CGH-array (vergelijkende genomische hybridisatie). Ons team heeft zelfs al een toepassing ontwikkeld van de metafase-CGH-methode op afzonderlijke cellen geïsoleerd door ISET, waarin we de winst van chromosoom 21-DNA konden aantonen in afzonderlijke foetale cellen geïsoleerd uit navelstrengbloed van een foetus met het syndroom van Down. De tweede strategie zal worden bereikt met behulp van kwantitatieve fluorescerende PCR-analyse van korte tandemherhalingen (STR's), toegepast op afzonderlijke cellen. Ten minste 5-8 zeer polymorfe STR-markers specifiek voor chromosoom 21 zullen worden getest om de effecten van een fenomeen genaamd allel drop-out, waarbij één allel niet amplificeert, te minimaliseren en om het aantal triallele signalen te maximaliseren voor een nauwkeurige diagnose van disomie of trisomie 21.

Dit onderzoek wordt uitgevoerd in samenwerking met de afdeling Gynaecologie-Verloskunde - Reproductieve Geneeskunde van het Antoine Béclère-ziekenhuis in Clamart. Voor de invasieve test (vruchtwaterpunctie) krijgen de vrouwen die deelnemen aan het onderzoek een bloedmonster van 20 ml en een uitstrijkje van de baarmoederhals. Het bloedmonster wordt binnen 3 uur na afname volgens de ISET-methode behandeld en het filter wordt bewaard bij -20°C. De cellen verkregen door uitstrijkjes worden in een geschikte vloeistof bewaard en vervolgens behandeld volgens de ISET-methode in het Biochemielaboratorium van het Necker-ziekenhuis. De moleculaire analyses gericht op de trofoblastcellen voor de NI-PND van trisomie 21 zullen in een blinde studie worden uitgevoerd.

De initiatiefnemers zijn van plan om de ISET-methode te gebruiken in een blinde studie met 100 gevallen van trisomie 21 en 300 controlegevallen met een normaal caryotype. Deze studie zal het mogelijk maken resultaten te verkrijgen met een sensitiviteit van meer dan 97 % en een specificiteit van meer dan 99 % (IC 95 % [70-100]). De validatie zal worden verkregen door de opening van de blinde studie en de vergelijking van de resultaten verkregen met de invasieve methode (vruchtwaterpunctie) en de niet-invasieve methode.