Trisomian 21 ei-invasiivinen synnytystä edeltävä diagnoosi kiertävien sikiösolujen geneettisellä analyysillä (ISETTRI21)

Tutkijat ovat suunnitelleet ja kehittäneet seuraavan lähestymistavan: sikiön solut rikastetaan ensin raskaana olevien naisten verestä 7-12 raskausviikon välillä käyttäen ISET-tekniikkaa (epiteelisolujen eristäminen koon mukaan). Solut, joiden oletetaan olevan sikiöperäisiä, leikataan mikroleikkauksella ja analysoidaan sen jälkeen geneettisesti käyttämällä STR-markkereita niiden sikiön luonteen varmistamiseksi. Tämän jälkeen tutkijat aikovat testata kahta strategiaa arvioidakseen kromosomin 21 kopioiden lukumäärän. Ensimmäinen koskee yksittäisen sikiösolun DNA:ta, joka analysoidaan CGH:lla (vertailu genomihybridisaatiolla). Itse asiassa tiimimme on jo kehittänyt metafaasi-CGH-menetelmän sovelluksen ISET:n eristämiin yksittäisiin soluihin, jossa pystyimme osoittamaan kromosomin 21 DNA:n lisääntymisen yksittäisissä sikiösoluissa, jotka on eristetty Downin oireyhtymää sairastavan sikiön napanuoraverestä. Toinen strategia toteutetaan käyttämällä yksittäisiin soluihin sovellettua lyhyiden tandemtoistojen (STR:t) kvantitatiivista fluoresoivaa PCR-analyysiä. Ainakin 5-8 erittäin polymorfista kromosomille 21 spesifistä STR-markkeria testataan, jotta voidaan minimoida alleelipudotukseksi kutsutun ilmiön vaikutukset, jossa yksi alleeli ei voi vahvistua, ja maksimoida trialleelisten signaalien määrä tarkkaa disomian diagnoosia varten. tai trisomia 21.

Tämä kysely suoritetaan yhteistyössä Clamartissa sijaitsevan Antoine Béclèren sairaalan gynekologian ja synnytyslääketieteen osaston kanssa. Kyselyyn osallistuneilta naisilta otetaan 20 ml verinäyte ja kohdunkaulan Pap-koe ennen invasiivista testiä (amniocenteesia). Verinäyte käsitellään ISET-menetelmällä 3 tunnin sisällä keräämisestä ja suodatin säilytetään -20°C:ssa. Pap-kokeella saadut solut säilytetään sopivassa nesteessä ja käsitellään sitten ISET-menetelmällä Neckerin sairaalan biokemian laboratoriossa. Trisomian 21 NI-PND:n trofoblastisiin soluihin suunnatut molekyylianalyysit suoritetaan sokkotutkimuksessa.

Aloittajat ovat suunnitelleet käyttävänsä ISET-menetelmää sokkotutkimuksessa, joka sisältää 100 trisomia 21 tapausta ja 300 kontrollitapausta normaalilla karyotyypillä. Tämän tutkimuksen avulla voidaan saada tuloksia, joiden herkkyys on yli 97 % ja spesifisyys yli 99 % (IC 95 % [70-100]). Validointi saadaan avaamalla sokkotutkimus ja vertaamalla invasiivisella menetelmällä (amniocenteesi) ja ei-invasiivisella menetelmällä saatuja tuloksia.