GvHD 診断をサポートするための CEC カウントの変更。 (ALLOCEC)

内皮損傷は、アロ HSCT (GVHD、IPS、VOD、TMA) の過程で発生する可能性のある血管起源のいくつかの合併症に共通する特徴です。 血管合併症の診断は興味深い課題ですが、残念ながら、内皮損傷のマーカーが非常に少ないという事実によって限界があります。 特に、フォン・ヴィレブランド因子、トロンボモジュリン、および接着分子の血漿用量は、高度の非特異性および関連する併存疾患によるアッセイへの潜在的な影響について、ルーチン診断の潜在的なアプリケーションに使用するのが困難な結果を生成しました。受信者。 はるかに有望な方法は、内皮細胞 (EMP) に由来する微粒子の評価または循環内皮細胞 (CEC) の直接計数に基づく方法であると思われます。 最近、アロ HSCT を受けた 19 人の患者のフローサイトメトリー (アネキシン V-FITC および抗 CD62-PE) によって EMP が評価され、GvHD を示さなかった患者と比較して、急性 GvHD グレード ≥ I の患者の増加が示されました。 さらに、EMP の評価は、放射線化学療法によるコンディショニング レジメンの影響を受けないようでした。 しかしながら、この方法は、微小粒子が血小板、赤血球および白血球からだけでなく内皮細胞からも放出される可能性があるという事実のために、手順の複雑さとある程度の非特異性を伴う。

現在、CEC の直接計数は、内皮損傷の程度を評価する最も信頼できる方法のようです。 上昇した数の CEC の所見は、自己免疫性の多数の病状における内皮損傷の程度を反映していることが示されていますが、同種 HSCT の過程におけるまだ予備的なデータです。 Woywodt等。 ANCA陽性血管炎の患者において、CECの数と疾患活動性および治療への反応の程度との相関関係が実証されました。 さらに、CEC の数は、腎移植を受けている患者では、臓器拒絶反応のリスクと相関しています。 同種 HSCT の過程で、同じ著者は、CEC の数と放射線化学療法前処置レジメンによって誘発される内皮損傷との間の相関関係を示しました。 ただし、標準化された方法の欠如、免疫選択の手動手順の使用、CEC の同定に関するコンセンサスの欠如は、日常的な適用の制限要因を表しています。

本研究は、前向き研究の形をとる。 主要評価項目は、同種 HSCT を受ける血液疾患患者の末梢血中の CEC を、内皮損傷の関数として特定および列挙することです。 副次評価項目は、GvHD の診断および治療への反応における CEC 数の変化の予後および予測値を定義することです。

末梢血 (PB) は、前 (T1、ベースライン) およびコンディショニング レジメンの最後 (T2、移植前)、造血回復の確認時 (T3、生着)、およびその後の GVHD (GVHD T4) の発症時に採取されます。 GvHD の制御のためのステロイド療法 (T5、GvHD 後) の開始後 1 週間。 すべての患者は、+ 28日目にCECもチェックされます。

CECをカウントするための末梢血は、CellSearch®システムでカウントするため、およびCBCでカウントするために、室温での細胞の安定化のための防腐剤を含むCellSave Preservative Tube（Veridex、J＆J、USA）にそれぞれ収集されます。フローサイトメトリーによるカウント用の K2EDTA を含むチューブ。

CellSearch® System では、その形態が細胞の形態と一致し、同時に次の表現型を示す場合、イベントは CEC として分類されます: CD146+、CD105+、DAPI+、および CD45-。 フローサイトメトリー手順により、Endo Panel チューブ (CD146、7-AAD、CD34、CD309、CD45) の凍結乾燥抗体で細胞を染色した後、リンパ単球ゲートの 4x106 イベントがフローサイトメトリーで直ちに取得されます。