Endringer i CEC-telling for å støtte GvHD-diagnose. (ALLOCEC)

Endotelskaden er en karakteristikk som er felles for flere komplikasjoner av vaskulær opprinnelse som kan oppstå i løpet av allo-HSCT (GVHD, IPS, VOD, TMA). Diagnosen vaskulære komplikasjoner representerer en interessant utfordring, men dessverre begrenset av det faktum at markørene for endotelskade er ekstremt knappe. Spesielt genererte den plasmatiske dosen av von Willebrand-faktor, trombomodulin og adhesjonsmolekyler resultater som var vanskelige å bruke for en potensiell applikasjon for rutinediagnostikk for den høye graden av ikke-spesifisitet og den potensielle påvirkningen på analysen av komorbide tilstander relatert til mottaker. Mye mer lovende metoder ser ut til å være de som er basert på evaluering av mikropartikler avledet fra endotelceller (EMP) eller direkte telling av sirkulerende endotelceller (CEC). Nylig ble EMP vurdert ved flowcytometri (annexin V-FITC og anti-CD62-PE) hos 19 pasienter som gjennomgikk allo-HSCT, og viste en økning i pasienter med akutt GvHD grad ≥ I, sammenlignet med pasienter som ikke viste GvHD. I tillegg så ikke evalueringen av EMP ut til å være påvirket av radiokjemoterapi-kondisjoneringsregimet. Denne metoden er imidlertid belastet med en prosessuell kompleksitet og en viss grad av uspesifisitet på grunn av at mikropartiklene kan frigjøres av endotelceller så vel som fra blodplater, røde blodceller og leukocytter.

For øyeblikket ser direkte telling av CEC ut til å være de mest pålitelige måtene å vurdere graden av endotelskade. Funnet av forhøyet antall CEC har vist seg å reflektere omfanget av endotelskade i en rekke patologier av autoimmun natur, men er fortsatt foreløpige data i løpet av allo-HSCT. Woywodt et al. viste hos pasienter med ANCA-positiv vaskulitt en korrelasjon mellom antall CEC og graden av sykdomsaktivitet og respons på behandling. Dessuten korrelerer antallet CEC, hos pasienter som gjennomgår nyretransplantasjon, med risikoen for organavstøtning. I løpet av allo-HSCT har de samme forfatterne vist en korrelasjon mellom antall CEC og endotelskade indusert av radiokjemoterapi-kondisjoneringsregime. Imidlertid representerer mangelen på en standardisert metode, bruken av manuelle prosedyrer for immunseleksjon, mangelen på konsensus om identifisering av CEC begrensende faktorer for rutinemessig bruk.

Denne studien har form av en prospektiv studie. Det primære endepunktet er identifisering og opptelling av CEC i perifert blod hos pasienter med hematologiske lidelser som gjennomgår allo-HSCT, som en funksjon av endotelskade. Det sekundære endepunktet er å definere den prognostiske og prediktive verdien av endringer i CEC-tellinger på diagnosen GvHD og på responsen på behandlingen.

Perifert blod (PB) vil bli tappet før (T1, baseline) og ved slutten av kondisjoneringsregimet (T2, pre-transplantasjon), ved bekreftelse av hematopoetisk utvinning (T3, engraftment) og deretter ved utbruddet av GVHD (GVHD T4) og en uke etter oppstart av steroidbehandling (T5, post-GvHD) for kontroll av GvHD. Alle pasienter vil også bli sjekket for CEC på dag + 28.

Det perifere blodet for telling av CEC vil bli samlet inn henholdsvis i CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA), som inneholder et konserveringsmiddel for stabilisering av cellene ved romtemperatur, for telling med CellSearch® System og i CBC rør som inneholder K2EDTA, for telling ved flowcytometri.

Ved CellSearch®-systemet vil en hendelse bli klassifisert som CEC når dens morfologi er i samsvar med den til en celle og samtidig viser følgende fenotype: CD146+, CD105+, DAPI+ og CD45-. Ved flowcytometriprosedyren, etter farging av celler med lyofiliserte antistoffer fra Endo Panel-røret (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) vil 4x106 hendelser i lymfo-monocyttporten umiddelbart bli innhentet ved flowcytometri.