CEC-Zähleränderungen zur Unterstützung der GvHD-Diagnose. (ALLOCEC)

Die Endothelschädigung ist ein gemeinsames Merkmal mehrerer Komplikationen vaskulären Ursprungs, die im Verlauf der allo-HSCT (GVHD, IPS, VOD, TMA) auftreten können. Die Diagnose vaskulärer Komplikationen stellt eine interessante Herausforderung dar, ist aber leider dadurch eingeschränkt, dass die Marker für Endothelschäden äußerst spärlich sind. Insbesondere die plasmatische Dosierung von von-Willebrand-Faktor, Thrombomodulin und Adhäsionsmolekülen erzeugte Ergebnisse, die für eine potenzielle Anwendung in der Routinediagnostik wegen des hohen Grades an Unspezifität und der möglichen Beeinflussung des Assays durch komorbide Bedingungen im Zusammenhang mit den schwierig zu verwenden sind Empfänger. Vielversprechender scheinen Methoden zu sein, die auf der Auswertung von Mikropartikeln aus Endothelzellen (EMP) oder der direkten Zählung zirkulierender Endothelzellen (CEC) beruhen. Kürzlich wurden die EMP durch Durchflusszytometrie (Annexin V-FITC und Anti-CD62-PE) bei 19 Patienten, die sich einer allo-HSZT unterzogen, bewertet, was einen Anstieg bei Patienten mit akuter GvHD Grad ≥ I im Vergleich zu Patienten ohne GvHD zeigte. Darüber hinaus schien die Bewertung von EMP durch das Radio-Chemotherapie-Konditionierungsschema nicht beeinflusst zu werden. Dieses Verfahren ist jedoch mit einem verfahrenstechnischen Aufwand und einer gewissen Unspezifität belastet, da die Mikropartikel sowohl von Endothelzellen als auch von Blutplättchen, roten Blutkörperchen und Leukozyten freigesetzt werden können.

Derzeit scheint die direkte Zählung der CEC die zuverlässigste Methode zu sein, um das Ausmaß der Endothelschädigung zu beurteilen. Es hat sich gezeigt, dass der Befund erhöhter CEC-Zahlen das Ausmaß der Endothelschädigung bei zahlreichen Pathologien autoimmuner Natur widerspiegelt, aber noch vorläufige Daten im Verlauf der allo-HSCT sind. Woywodt et al. zeigten bei Patienten mit ANCA-positiver Vaskulitis eine Korrelation zwischen der Anzahl der CEC und dem Grad der Krankheitsaktivität und dem Ansprechen auf die Behandlung. Darüber hinaus korreliert die Anzahl der CEC bei Patienten, die sich einer Nierentransplantation unterziehen, mit dem Risiko einer Organabstoßung. Im Verlauf der allo-HSCT haben die gleichen Autoren eine Korrelation zwischen der Anzahl der CEC und Endothelschäden gezeigt, die durch das Radio-Chemotherapie-Konditionierungsschema induziert wurden. Das Fehlen einer standardisierten Methode, die Verwendung manueller Verfahren der Immunselektion und der fehlende Konsens zur Identifizierung von CEC stellen jedoch limitierende Faktoren für die routinemäßige Anwendung dar.

Die vorliegende Studie ist als prospektive Studie angelegt. Der primäre Endpunkt ist die Identifizierung und Auszählung von CECs im peripheren Blut von Patienten mit hämatologischen Erkrankungen, die sich einer allo-HSCT unterziehen, als Funktion der Endothelschädigung. Der sekundäre Endpunkt besteht darin, den prognostischen und prädiktiven Wert von Änderungen der CEC-Zahlen für die Diagnose von GvHD und das Ansprechen auf die Behandlung zu definieren.

Peripheres Blut (PB) wird vor (T1, Baseline) und am Ende des Konditionierungsschemas (T2, vor der Transplantation), nach Bestätigung der hämatopoetischen Erholung (T3, Transplantation) und danach bei Beginn der GVHD (GVHD T4) entnommen. und eine Woche nach Beginn der Steroidtherapie (T5, post-GvHD) zur Kontrolle der GvHD. Alle Patienten werden auch am Tag + 28 auf CEC untersucht.

Das periphere Blut für die CEC-Zählung wird jeweils im CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA), das ein Konservierungsmittel zur Stabilisierung der Zellen bei Raumtemperatur enthält, für die Zählung mit dem CellSearch®-System und im CBC gesammelt Röhrchen mit K2EDTA, zur Zählung durch Durchflusszytometrie.

Durch das CellSearch®-System wird ein Ereignis als CEC klassifiziert, wenn seine Morphologie mit der einer Zelle übereinstimmt und gleichzeitig den folgenden Phänotyp aufweist: CD146+, CD105+, DAPI+ und CD45-. Durch das durchflusszytometrische Verfahren werden nach dem Färben von Zellen mit lyophilisierten Antikörpern des Endo-Panel-Röhrchens (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) 4 x 106 Ereignisse im Lympho-Monozyten-Gate sofort bei der Durchflusszytometrie erfasst.