Ændringer i CEC-tal for at understøtte GvHD-diagnose. (ALLOCEC)

Endotelbeskadigelsen er en karakteristik, der er fælles for flere komplikationer af vaskulær oprindelse, der kan opstå i løbet af allo-HSCT (GVHD, IPS, VOD, TMA). Diagnosen af ​​vaskulære komplikationer repræsenterer en interessant udfordring, men desværre begrænset af det faktum, at markørerne for endotelskade er ekstremt sparsomme. Især gav den plasmatiske dosering af von Willebrand faktor, trombomodulin og adhæsionsmolekyler resultater, der var vanskelige at bruge til en potentiel anvendelse til rutinediagnostik for den høje grad af uspecificitet og den potentielle indflydelse på assayet af co-morbide tilstande relateret til modtager. Meget mere lovende metoder synes at være dem, der er baseret på evaluering af mikropartikler afledt af endotelceller (EMP) eller direkte optælling af cirkulerende endotelceller (CEC). For nylig blev EMP vurderet ved flowcytometri (annexin V-FITC og anti-CD62-PE) hos 19 patienter, der gennemgår allo-HSCT, hvilket viste en stigning i patienter med akut GvHD grad ≥ I sammenlignet med patienter, der ikke viste GvHD. Derudover så evalueringen af ​​EMP ikke ud til at være påvirket af radiokemoterapi-konditioneringsregimet. Denne metode er imidlertid belastet med en proceduremæssig kompleksitet og en vis grad af uspecificitet, som følge af det faktum, at mikropartiklerne kan frigives af endotelceller såvel som fra blodplader, røde blodlegemer og leukocytter.

I øjeblikket ser den direkte optælling af CEC ud til at være den mest pålidelige måde at vurdere graden af ​​endotelskade på. Fundet af forhøjede antal CEC har vist sig at afspejle omfanget af endotelskade i adskillige patologier af autoimmun natur, men er stadig foreløbige data i løbet af allo-HSCT. Woywodt et al. påvist hos patienter med ANCA-positiv vaskulitis en sammenhæng mellem antallet af CEC og graden af ​​sygdomsaktivitet og respons på behandling. Desuden korrelerer antallet af CEC hos patienter, der gennemgår nyretransplantation, med risikoen for organafstødning. I løbet af allo-HSCT har de samme forfattere vist en sammenhæng mellem antallet af CEC og endotelskader induceret af radio-kemoterapi konditioneringsregime. Imidlertid repræsenterer manglen på en standardiseret metode, brugen af ​​manuelle procedurer for immunselektion, manglen på konsensus om identifikation af CEC begrænsende faktorer for rutinemæssig anvendelse.

Nærværende undersøgelse har form af en prospektiv undersøgelse. Det primære endepunkt er identifikation og optælling af CEC'er i perifert blod hos patienter med hæmatologiske lidelser, der gennemgår allo-HSCT, som en funktion af endotelskade. Det sekundære endepunkt er at definere den prognostiske og prædiktive værdi af ændringer i CEC-tal på diagnosen af ​​GvHD og på responsen på behandlingen.

Perifert blod (PB) vil blive udtaget før (T1, baseline) og i slutningen af ​​konditioneringsregimet (T2, præ-transplantation), efter bekræftelse af hæmatopoietisk genopretning (T3, engraftment) og derefter ved indtræden af ​​GVHD (GVHD T4) og en uge efter starten af ​​steroidbehandling (T5, post-GvHD) til kontrol af GvHD. Alle patienter vil også blive tjekket for CEC på dag + 28.

Det perifere blod til tælling af CEC vil blive opsamlet i henholdsvis CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA), indeholdende et konserveringsmiddel til stabilisering af cellerne ved stuetemperatur, til tælling med CellSearch® System og i CBC rør indeholdende K2EDTA, til tælling ved flowcytometri.

Ved CellSearch®-systemet vil en hændelse blive klassificeret som CEC, når dens morfologi er i overensstemmelse med en celles og samtidig viser følgende fænotype: CD146+, CD105+, DAPI+ og CD45-. Ved flowcytometriproceduren, efter farvning af celler med lyofiliserede antistoffer af Endo Panel-røret (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) vil 4x106 hændelser i lymfo-monocytporten straks blive erhvervet ved flowcytometri.