GvHD 진단을 지원하기 위한 CEC 카운트 변경. (ALLOCEC)

내피 손상은 allo-HSCT(GVHD, IPS, VOD, TMA) 과정에서 발생할 수 있는 혈관 기원의 여러 합병증에 공통적인 특징입니다. 혈관 합병증의 진단은 흥미로운 도전이지만 불행하게도 내피 손상의 마커가 극히 드물다는 사실에 의해 제한됩니다. 특히, von Willebrand factor, thrombomodulin 및 접착 분자의 혈장 투여량은 높은 수준의 비특이성 및 관련 동반이환 조건에 의한 분석에 대한 잠재적 영향으로 인해 일상적인 진단에 잠재적인 적용에 사용하기 어려운 결과를 생성했습니다. 받는 사람. 훨씬 더 유망한 방법은 내피 세포(EMP)에서 파생된 미립자의 평가 또는 순환 내피 세포(CEC)의 직접 계산을 기반으로 하는 것으로 보입니다. 최근 EMP는 동종 조혈 모세포 이식을 받는 19명의 환자에서 유동 세포 계측법(아넥신 V-FITC 및 항-CD62-PE)으로 평가되었으며, GvHD를 나타내지 않는 환자에 비해 급성 GvHD 등급 ≥ I인 환자의 증가를 보여줍니다. 또한, EMP의 평가는 방사선 화학요법 컨디셔닝 요법에 의해 영향을 받지 않는 것으로 나타났습니다. 그러나 이 방법은 미립자가 내피 세포뿐만 아니라 혈소판, 적혈구 및 백혈구에서도 방출될 수 있다는 사실로 인해 절차상의 복잡성과 어느 정도의 비특이성으로 인해 부담이 됩니다.

현재 CEC를 직접 계산하는 것이 내피 손상 정도를 평가하는 가장 신뢰할 수 있는 방법인 것 같습니다. 증가된 수의 CEC 발견은 자가 면역 성질의 수많은 병리학에서 내피 손상의 정도를 반영하는 것으로 나타났지만 여전히 동종 조혈 모세포 이식 과정에서 예비 데이터입니다. Woywodt et al. ANCA 양성 혈관염 환자에서 CEC 수와 질병 활동 정도 및 치료에 대한 반응 사이의 상관 관계가 입증되었습니다. 더욱이, CEC의 수는 신장 이식을 받는 환자에서 장기 거부의 위험과 관련이 있습니다. allo-HSCT 과정에서 동일한 저자는 CEC의 수와 방사선 화학 요법 컨디셔닝 요법에 의해 유도된 내피 손상 사이의 상관 관계를 보여주었습니다. 그러나 표준화된 방법의 부족, 면역 선택의 수동 절차 사용, CEC 식별에 대한 합의 부족은 일상적인 적용에 대한 제한 요소를 나타냅니다.

본 연구는 전향적 연구의 형태를 취하고 있다. 1차 종점은 내피 손상의 함수로서 동종조혈모세포이식(allo-HSCT)을 받는 혈액학적 장애가 있는 환자의 말초 혈액에서 CEC를 식별하고 열거하는 것입니다. 2차 종점은 GvHD 진단 및 치료 반응에 대한 CEC 계수 변화의 예후 및 예측 값을 정의하는 것입니다.

말초 혈액(PB)은 조혈 회복 확인 시(T3, 생착) 및 이후 GVHD(GVHD T4) 개시 시(T1, 기준선) 및 컨디셔닝 요법 종료 시(T2, 이식 전) 채취됩니다. 그리고 GvHD의 조절을 위한 스테로이드 요법(T5, post-GvHD) 시작 후 1주. 모든 환자는 또한 +28일에 CEC에 대해 검사됩니다.

CEC를 계수하기 위한 말초 혈액은 각각 CellSearch® System 및 CBC에서 계수하기 위해 실온에서 세포의 안정화를 위한 보존제를 포함하는 CellSave Preservative Tube(Veridex, J & J, USA)에 수집됩니다. K2EDTA가 포함된 튜브, 유동 세포 계측법으로 계수.

CellSearch® 시스템에 의해 이벤트의 형태가 세포의 형태와 일치하고 동시에 CD146+, CD105+, DAPI+ 및 CD45- 표현형을 나타내는 경우 이벤트는 CEC로 분류됩니다. 유세포 분석 절차에 의해 Endo 패널 튜브(CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45)의 동결건조 항체로 세포를 염색한 후 림프-단핵구 게이트에서 4x106 이벤트가 유세포 분석에서 즉시 획득됩니다.