Alterações na contagem de CEC para dar suporte ao diagnóstico de GvHD. (ALLOCEC)

O dano endotelial é uma característica comum a várias complicações de origem vascular que podem ocorrer no curso do alo-HSCT (GVHD, IPS, VOD, TMA). O diagnóstico de complicações vasculares representa um desafio interessante, mas infelizmente limitado pelo fato de que os marcadores de dano endotelial são extremamente escassos. Em particular, a dosagem plasmática de fator de von Willebrand, trombomodulina e moléculas de adesão gerou resultados difíceis de usar para uma aplicação potencial para diagnósticos de rotina pelo alto grau de não especificidade e a influência potencial no ensaio por condições comórbidas relacionadas ao destinatário. Métodos muito mais promissores parecem ser aqueles que se baseiam na avaliação de micropartículas derivadas de células endoteliais (EMP) ou na contagem direta de células endoteliais circulantes (CEC). Recentemente, os EMP foram avaliados por citometria de fluxo (anexina V-FITC e anti-CD62-PE) em 19 pacientes submetidos a alo-HSCT, mostrando um aumento em pacientes com GvHD grau ≥ I, em comparação com pacientes que não apresentavam GvHD. Além disso, a avaliação do EMP não pareceu ser afetada pelo regime de condicionamento de radioquimioterapia. Este método é, no entanto, carregado com uma complexidade processual e um certo grau de não especificidade devido ao fato de que as micropartículas podem ser liberadas por células endoteliais, bem como por plaquetas, glóbulos vermelhos e leucócitos.

Atualmente, a contagem direta do CEC parece ser a forma mais confiável de avaliar o grau de dano endotelial. O achado de números elevados de CEC demonstrou refletir a extensão do dano endotelial em inúmeras patologias de natureza autoimune, mas ainda são dados preliminares no curso do alo-HSCT. Woywodt et ai. demonstraram em pacientes com vasculite ANCA positiva uma correlação entre o número de CEC e o grau de atividade da doença e resposta ao tratamento. Além disso, o número de CEC correlaciona-se, em pacientes submetidos a transplante renal, com o risco de rejeição do órgão. No curso do alo-HSCT, os mesmos autores mostraram uma correlação entre o número de CEC e o dano endotelial induzido pelo regime de condicionamento de radioquimioterapia. No entanto, a falta de um método padronizado, o uso de procedimentos manuais de imunosseleção, a falta de consenso na identificação de CEC representam fatores limitantes para aplicação rotineira.

O presente estudo assume a forma de um estudo prospectivo. O endpoint primário é a identificação e contagem de CECs no sangue periférico de pacientes com distúrbios hematológicos submetidos a alo-HSCT, em função do dano endotelial. O objetivo secundário é definir o valor prognóstico e preditivo das alterações nas contagens de CEC no diagnóstico de GvHD e na resposta ao tratamento.

Sangue periférico (PB) será coletado antes (T1, linha de base) e ao final do regime de condicionamento (T2, pré-transplante), na confirmação da recuperação hematopoiética (T3, enxerto) e posteriormente no início da GVHD (GVHD T4) e uma semana após o início da corticoterapia (T5, pós-GvHD) para o controle da GvHD. Todos os pacientes também serão verificados para CEC no dia + 28.

O sangue periférico para contagem de CEC será coletado, respectivamente, no CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA), contendo um conservante para estabilização das células em temperatura ambiente, para contagem com o Sistema CellSearch® e em hemograma tubo contendo K2EDTA, para contagem por citometria de fluxo.

Pelo Sistema CellSearch® um evento será classificado como CEC quando sua morfologia for compatível com a de uma célula e simultaneamente apresentar o seguinte fenótipo: CD146+, CD105+, DAPI+ e CD45-. Pelo procedimento de citometria de fluxo, após a coloração das células com anticorpos liofilizados do tubo Endo Panel (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) 4x106 eventos no portão de linfomonócitos serão imediatamente adquiridos na citometria de fluxo.