CEC-laskennan muutokset tukevat GvHD-diagnoosia. (ALLOCEC)

Endoteelivaurio on yhteinen ominaisuus useille verisuoniperäisille komplikaatioille, joita voi esiintyä allo-HSCT:n (GVHD, IPS, VOD, TMA) aikana. Verisuonikomplikaatioiden diagnoosi on mielenkiintoinen haaste, mutta valitettavasti sitä rajoittaa se, että endoteelivaurioiden merkkiaineet ovat erittäin niukat. Erityisesti von Willebrandin tekijän, trombomoduliinin ja adheesiomolekyylien plasmaannostus tuotti tuloksia, joita oli vaikea käyttää mahdollisessa rutiinidiagnostiikassa suuren epäspesifisyyden ja mahdollisen vaikutuksen vuoksi kokeeseen liittyvien samanaikaisten sairauksien vuoksi. vastaanottaja. Paljon lupaavampia näyttävät olevan menetelmät, jotka perustuvat endoteelisoluista (EMP) peräisin olevien mikropartikkelien arviointiin tai verenkierron endoteelisolujen (CEC) suoraan laskemiseen. Äskettäin EMP arvioitiin virtaussytometrillä (anneksiini V-FITC ja anti-CD62-PE) 19 potilaalla, joille tehtiin allo-HSCT, mikä osoitti lisääntynyttä potilaita, joilla oli akuutti GvHD-aste ≥ I verrattuna potilaisiin, joilla ei ollut GvHD:tä. Lisäksi sädekemoterapian hoito-ohjelma ei näyttänyt vaikuttavan EMP:n arviointiin. Tätä menetelmää rasittaa kuitenkin menettelyllinen monimutkaisuus ja tietty epäspesifisyys, koska mikropartikkelit voivat vapautua endoteelisoluista sekä myös verihiutaleista, punasoluista ja leukosyyteistä.

Tällä hetkellä CEC:n suora laskenta näyttää olevan luotettavin tapa arvioida endoteelivaurion astetta. Kohonneiden CEC-määrien löydön on osoitettu heijastavan endoteelivaurion laajuutta useissa autoimmuuniluonteisissa patologioissa, mutta ne ovat edelleen alustavia tietoja allo-HSCT:n aikana. Woywodt et ai. osoittivat ANCA-positiivista vaskuliittia sairastavilla potilailla korrelaation CEC:n määrän ja taudin aktiivisuuden asteen ja hoitovasteen välillä. Lisäksi CEC:n määrä korreloi munuaisensiirtopotilailla elimen hylkimisreaktion riskin kanssa. Allo-HSCT:n aikana samat kirjoittajat ovat osoittaneet korrelaation CEC:n määrän ja sädekemoterapian hoito-ohjelman aiheuttaman endoteelivaurion välillä. Standardoidun menetelmän puute, manuaalisten immuunivalinnan menetelmien käyttö, yksimielisyyden puute CEC:n tunnistamisesta ovat kuitenkin rajoittavia tekijöitä rutiininomaista käyttöä varten.

Tämä tutkimus toteutetaan prospektiivisen tutkimuksen muodossa. Ensisijainen päätetapahtuma on CEC:ien tunnistaminen ja laskeminen perifeerisessä veressä potilailla, joilla on hematologisia sairauksia ja joille tehdään allo-HSCT, endoteelivaurion funktiona. Toissijainen päätetapahtuma on määrittää CEC-laskennan prognostinen ja ennustava arvo GvHD-diagnoosin ja hoitovasteen muutosten suhteen.

Perifeerinen veri (PB) otetaan ennen hoito-ohjelman (T1, perustaso) ja sen lopussa (T2, ennen siirtoa), kun hematopoieettinen palautuminen varmistetaan (T3, siirrännäinen) ja sen jälkeen GVHD:n alkaessa (GVHD T4) ja yksi viikko steroidihoidon aloittamisen jälkeen (T5, post-GvHD) GvHD:n hallintaan. Kaikille potilaille tarkistetaan myös CEC päivänä + 28.

Perifeerinen veri CEC:n laskemista varten kerätään vastaavasti CellSave Preservative Tube -putkeen (Veridex, J & J, USA), joka sisältää säilöntäainetta solujen stabiloimiseksi huoneenlämpötilassa, laskemista varten CellSearch® System -järjestelmällä ja CBC:ssä. putki, joka sisältää K2EDTA:ta, virtaussytometriaa varten.

CellSearch®-järjestelmä luokittelee tapahtuman CEC:ksi, kun sen morfologia on yhdenmukainen solun morfologian kanssa ja osoittaa samanaikaisesti seuraavan fenotyypin: CD146+, CD105+, DAPI+ ja CD45-. Virtaussytometriamenetelmällä solujen värjäyksen jälkeen Endo Panel -putken lyofilisoiduilla vasta-aineilla (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) 4x106-tapahtumat lymfomonosyyttiportissa saadaan välittömästi virtaussytometristä.