Cambios en el recuento de CEC para respaldar el diagnóstico de GvHD. (ALLOCEC)

El daño endotelial es una característica común a varias complicaciones de origen vascular que pueden ocurrir en el curso del alo-TPH (GVHD, IPS, VOD, TMA). El diagnóstico de complicaciones vasculares representa un desafío interesante, pero lamentablemente limitado por el hecho de que los marcadores de daño endotelial son extremadamente escasos. En particular, la dosificación plasmática del factor de von Willebrand, la trombomodulina y las moléculas de adhesión generaron resultados difíciles de utilizar para una posible aplicación en el diagnóstico de rutina por el alto grado de inespecificidad y la posible influencia en el ensayo de condiciones comórbidas relacionadas con la recipiente. Métodos mucho más prometedores parecen ser aquellos que se basan en la evaluación de micropartículas derivadas de células endoteliales (EMP) o el recuento directo de células endoteliales circulantes (CEC). Recientemente, se evaluaron los EMP mediante citometría de flujo (anexina V-FITC y anti-CD62-PE) en 19 pacientes sometidos a alo-TPH, mostrando un aumento de pacientes con EICH aguda grado ≥ I, en comparación con pacientes que no presentaban EICH. Además, la evaluación de EMP no pareció verse afectada por el régimen de acondicionamiento de radioquimioterapia. Sin embargo, este método está cargado de una complejidad de procedimiento y un cierto grado de inespecificidad debido al hecho de que las micropartículas pueden ser liberadas por las células endoteliales así como también por las plaquetas, los glóbulos rojos y los leucocitos.

Actualmente, el conteo directo de la CEC parece ser la forma más confiable de evaluar el grado de daño endotelial. Se ha demostrado que el hallazgo de números elevados de CEC refleja la extensión del daño endotelial en numerosas patologías de naturaleza autoinmune, pero aún son datos preliminares en el curso de alo-HSCT. Woywodt et al. demostraron en pacientes con vasculitis ANCA positivos una correlación entre el número de CEC y el grado de actividad de la enfermedad y respuesta al tratamiento. Además, el número de CEC se correlaciona, en pacientes sometidos a trasplante renal, con el riesgo de rechazo del órgano. En el curso de alo-HSCT, los mismos autores han demostrado una correlación entre el número de CEC y el daño endotelial inducido por el régimen de acondicionamiento de radioquimioterapia. Sin embargo, la falta de un método estandarizado, el uso de procedimientos manuales de inmunoselección, la falta de consenso en la identificación de CEC representan factores limitantes para la aplicación de rutina.

El presente estudio tiene la forma de un estudio prospectivo. El punto final primario es la identificación y enumeración de CEC en sangre periférica de pacientes con trastornos hematológicos sometidos a alo-HSCT, en función del daño endotelial. El criterio de valoración secundario es definir el valor pronóstico y predictivo de los cambios en los recuentos de CEC en el diagnóstico de EICH y en la respuesta al tratamiento.

Se extraerá sangre periférica (PB) antes (T1, línea de base) y al final del régimen de acondicionamiento (T2, antes del trasplante), tras la confirmación de la recuperación hematopoyética (T3, injerto) y posteriormente al inicio de la EICH (EICH T4) y una semana después del inicio de la terapia con esteroides (T5, post-EICH) para el control de la EICH. Todos los pacientes también serán revisados ​​para CEC en el día + 28.

La sangre periférica para el conteo de CEC será recolectada, respectivamente, en el CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA), que contiene un conservante para la estabilización de las células a temperatura ambiente, para el conteo con el Sistema CellSearch® y en CBC tubo que contiene K2EDTA, para recuento por citometría de flujo.

Por el Sistema CellSearch® un evento será clasificado como CEC cuando su morfología sea consistente con la de una célula y muestre simultáneamente el siguiente fenotipo: CD146+, CD105+, DAPI+ y CD45-. Mediante el procedimiento de citometría de flujo, después de teñir las células con anticuerpos liofilizados del tubo Endo Panel (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) se obtendrán inmediatamente 4x106 eventos en la puerta de linfo-monocitos en la citometría de flujo.