Modifications du nombre de CEC pour prendre en charge le diagnostic GvHD. (ALLOCEC)

L'atteinte endothéliale est une caractéristique commune à plusieurs complications d'origine vasculaire pouvant survenir au cours d'une allo-GCSH (GVHD, IPS, VOD, MAT). Le diagnostic des complications vasculaires représente un défi intéressant, mais malheureusement limité par le fait que les marqueurs de lésions endothéliales sont extrêmement rares. En particulier, le dosage plasmatique du facteur von Willebrand, de la thrombomoduline et des molécules d'adhésion a généré des résultats difficilement utilisables pour une application potentielle pour le diagnostic de routine en raison du degré élevé de non-spécificité et de l'influence potentielle sur le dosage des conditions comorbides liées à la destinataire. Des méthodes beaucoup plus prometteuses semblent être celles basées sur l'évaluation de microparticules issues de cellules endothéliales (EMP) ou le comptage direct des cellules endothéliales circulantes (CEC). Récemment, les EMP ont été évalués par cytométrie en flux (annexine V-FITC et anti-CD62-PE) chez 19 patients subissant une allo-GCSH, montrant une augmentation du nombre de patients atteints de GvHD aiguë de grade ≥ I, par rapport aux patients ne présentant pas de GvHD. De plus, l'évaluation de l'EMP ne semble pas être affectée par le régime de conditionnement par radiochimiothérapie. Cette méthode est cependant grevée d'une complexité procédurale et d'un certain degré de non-spécificité du fait que les microparticules peuvent être libérées par les cellules endothéliales ainsi que par les plaquettes, les globules rouges et les leucocytes.

Actuellement, le comptage direct de la CEC semble être le moyen le plus fiable d'évaluer le degré de dommage endothélial. Il a été démontré que la découverte d'un nombre élevé de CEC reflète l'étendue des dommages endothéliaux dans de nombreuses pathologies de nature auto-immune, mais il s'agit encore de données préliminaires au cours de l'allo-HSCT. Woywodt et al. ont démontré chez les patients atteints de vascularite ANCA positive une corrélation entre le nombre de CEC et le degré d'activité de la maladie et la réponse au traitement. De plus, le nombre de CEC est corrélé, chez les patients subissant une transplantation rénale, au risque de rejet d'organe. Au cours de l'allo-GCSH, les mêmes auteurs ont montré une corrélation entre le nombre de CEC et les dommages endothéliaux induits par le régime de conditionnement par radio-chimiothérapie. Cependant, l'absence d'une méthode standardisée, l'utilisation de procédures manuelles d'immunosélection, l'absence de consensus sur l'identification des CEC représentent des facteurs limitants pour une application en routine.

La présente étude prend la forme d'une étude prospective. Le critère d'évaluation principal est l'identification et le dénombrement des CEC dans le sang périphérique des patients atteints de troubles hématologiques subissant une allo-GCSH, en fonction des lésions endothéliales. Le critère secondaire est de définir la valeur pronostique et prédictive de l'évolution du nombre de CEC sur le diagnostic de GvHD et sur la réponse au traitement.

Le sang périphérique (PB) sera prélevé avant (T1, ligne de base) et à la fin du régime de conditionnement (T2, pré-transplantation), lors de la confirmation de la récupération hématopoïétique (T3, prise de greffe) et ensuite au début de la GVHD (GVHD T4) et une semaine après le début de la corticothérapie (T5, post-GvHD) pour le contrôle de la GvHD. Tous les patients seront également contrôlés pour le CEC au jour + 28.

Le sang périphérique pour le comptage des CEC sera collecté, respectivement, dans le CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA), contenant un conservateur pour la stabilisation des cellules à température ambiante, pour le comptage avec le système CellSearch® et en CBC tube contenant du K2EDTA, pour comptage par cytométrie en flux.

Par le système CellSearch®, un événement sera classé comme CEC lorsque sa morphologie est cohérente avec celle d'une cellule et présente simultanément le phénotype suivant : CD146+, CD105+, DAPI+ et CD45-. Par la procédure de cytométrie en flux, après coloration des cellules avec des anticorps lyophilisés du tube Endo Panel (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45), 4x106 événements dans la porte lympho-monocyte seront immédiatement acquis à la cytométrie en flux.