CEC-tellingswijzigingen ter ondersteuning van GvHD-diagnose. (ALLOCEC)

De endotheelbeschadiging is een gemeenschappelijk kenmerk van verschillende complicaties van vasculaire oorsprong die kunnen optreden tijdens allo-HSCT (GVHD, IPS, VOD, TMA). De diagnose van vasculaire complicaties vormt een interessante uitdaging, maar wordt helaas beperkt door het feit dat de markers van endotheliale schade uiterst schaars zijn. Met name de plasmadosering van von Willebrand-factor, trombomoduline en adhesiemoleculen genereerde resultaten die moeilijk te gebruiken zijn voor een mogelijke toepassing voor routinediagnostiek vanwege de hoge mate van niet-specificiteit en de mogelijke invloed op de test door comorbide aandoeningen die verband houden met de ontvanger. Veel veelbelovender lijken methoden te zijn die zijn gebaseerd op de evaluatie van microdeeltjes afkomstig van endotheelcellen (EMP) of het direct tellen van circulerende endotheelcellen (CEC). Onlangs werden de EMP beoordeeld door flowcytometrie (annexine V-FITC en anti-CD62-PE) bij 19 patiënten die allo-HSCT ondergingen, wat een toename liet zien van patiënten met acute GvHD graad ≥ I, in vergelijking met patiënten die geen GvHD vertoonden. Bovendien leek de evaluatie van EMP niet te worden beïnvloed door het conditioneringsregime met radiochemotherapie. Deze methode gaat echter gepaard met een procedurele complexiteit en een zekere mate van niet-specificiteit doordat de microdeeltjes zowel door endotheelcellen als door bloedplaatjes, rode bloedcellen en leukocyten kunnen worden afgegeven.

Momenteel lijkt de directe telling van de CEC de meest betrouwbare manier om de mate van endotheliale schade te beoordelen. Het is aangetoond dat de bevinding van verhoogde aantallen CEC de mate van endotheliale schade in tal van pathologieën van auto-immune aard weerspiegelt, maar het zijn nog steeds voorlopige gegevens in de loop van allo-HSCT. Woywodt et al. toonde bij patiënten met ANCA-positieve vasculitis een correlatie aan tussen het aantal CEC's en de mate van ziekteactiviteit en respons op behandeling. Bovendien correleert het aantal CEC bij patiënten die een niertransplantatie ondergaan, met het risico op orgaanafstoting. In de loop van allo-HSCT hebben dezelfde auteurs een correlatie aangetoond tussen het aantal CEC en endotheliale schade veroorzaakt door radiochemotherapie-conditioneringsregime. Het ontbreken van een gestandaardiseerde methode, het gebruik van handmatige immunoselectieprocedures en het gebrek aan consensus over de identificatie van CEC vormen echter beperkende factoren voor routinematige toepassing.

Het huidige onderzoek heeft de vorm van een prospectief onderzoek. Het primaire eindpunt is de identificatie en telling van CEC's in perifeer bloed van patiënten met hematologische aandoeningen die allo-HSCT ondergaan, als functie van endotheliale schade. Het secundaire eindpunt is het bepalen van de prognostische en voorspellende waarde van veranderingen in CEC-tellingen bij de diagnose van GvHD en bij de respons op de behandeling.

Perifeer bloed (PB) zal worden afgenomen vóór (T1, basislijn) en aan het einde van het conditioneringsregime (T2, pre-transplantatie), na bevestiging van hematopoëtisch herstel (T3, implantatie) en daarna bij aanvang van GVHD (GVHD T4) en een week na de start van steroïdetherapie (T5, post-GvHD) voor de controle van GvHD. Alle patiënten worden op dag +28 ook gecontroleerd op CEC.

Het perifere bloed voor het tellen van CEC wordt respectievelijk verzameld in de CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, VS), die een conserveermiddel bevat voor de stabilisatie van de cellen bij kamertemperatuur, voor tellen met het CellSearch®-systeem en in CBC buisje met K2EDTA, voor tellen met flowcytometrie.

Door het CellSearch®-systeem wordt een gebeurtenis geclassificeerd als CEC wanneer de morfologie consistent is met die van een cel en tegelijkertijd het volgende fenotype vertoont: CD146+, CD105+, DAPI+ en CD45-. Door de flowcytometrieprocedure zullen na kleuring van cellen met gelyofiliseerde antilichamen van de Endo Panel-buis (CD146, 7-AAD, CD34, CD309, CD45) 4x106-gebeurtenissen in de lymfo-monocytpoort onmiddellijk worden verkregen bij flowcytometrie.