CEC 计数变化以支持 GvHD 诊断。 (ALLOCEC)

内皮损伤是同种异体 HSCT（GVHD、IPS、VOD、TMA）过程中可能发生的几种血管起源并发症的共同特征。 血管并发症的诊断代表了一个有趣的挑战，但不幸的是，内皮损伤的标志物极其稀少。 特别是，von Willebrand 因子、血栓调节蛋白和粘附分子的血浆剂量产生的结果难以用于常规诊断的潜在应用，因为高度的非特异性以及与接受者。 更有希望的方法似乎是那些基于对源自内皮细胞 (EMP) 的微粒的评估或循环内皮细胞 (CEC) 的直接计数的方法。 最近，通过流式细胞术（膜联蛋白 V-FITC 和抗 CD62-PE）对 19 名接受同种异体造血干细胞移植的患者进行了 EMP 评估，显示与未显示 GvHD 的患者相比，急性 GvHD ≥ I 级患者有所增加。 此外，EMP 的评估似乎不受放化疗预处理方案的影响。 然而，由于微粒可由内皮细胞以及血小板、红细胞和白细胞释放，因此该方法具有程序复杂性和一定程度的非特异性。

目前，直接计数 CEC 似乎是评估内皮损伤程度最可靠的方法。 CEC 数量增加的发现已被证明反映了许多自身免疫性病理中内皮损伤的程度，但仍然是同种异体 HSCT 过程中的初步数据。 Woywodt 等人。在 ANCA 阳性血管炎患者中证明了 CEC 的数量与疾病活动程度和对治疗的反应之间存在相关性。 此外，在接受肾移植的患者中，CEC 的数量与器官排斥的风险相关。 在同种异体造血干细胞移植过程中，同一作者显示了 CEC 数量与放化疗预处理方案引起的内皮损伤之间的相关性。 然而，缺乏标准化方法、使用手动免疫选择程序、对 CEC 的鉴定缺乏共识是常规应用的限制因素。

本研究采用前瞻性研究的形式。 主要终点是接受同种异体 HSCT 的血液病患者外周血中 CEC 的鉴定和计数，作为内皮损伤的函数。 次要终点是确定 CEC 计数变化对 GvHD 诊断和治疗反应的预后和预测价值。

外周血 (PB) 将在预处理方案之前（T1，基线）和结束时（T2，移植前），在确认造血恢复（T3，植入）和之后在 GVHD 发作时（GVHD T4）抽取并在类固醇治疗开始后一周（T5，GvHD 后）以控制 GvHD。 所有患者还将在第 + 28 天接受 CEC 检查。

用于CEC计数的外周血分别采集于CellSave Preservative Tube (Veridex, J & J, USA)中，含有防腐剂，用于在室温下稳定细胞，用于CellSearch®系统计数和CBC中含有 K2EDTA 的试管，用于流式细胞术计数。

通过 CellSearch® 系统，当事件的形态与细胞的形态一致并同时显示以下表型时，该事件将被归类为 CEC：CD146+、CD105+、DAPI+ 和 CD45-。 通过流式细胞术程序，在用 Endo Panel 管的冻干抗体（CD146、7-AAD、CD34、CD309、CD45）对细胞进行染色后，淋巴单核细胞门中的 4x106 个事件将立即在流式细胞术中获得。