TNFSF11 阻害と生殖能力: 前向き研究

NF-kB リガンド (RANKL) システムの受容体活性化因子は、骨の恒常性にとって重要であると考えられています。 RANKL には 3 つのアイソフォームが存在し、すべてのアイソフォームの効果は、特定の受容体 (NF-KB の受容体活性化因子 (RANK)) への結合によって媒介されます。 RANKL は主に膜貫通型タンパク質として発見されているため、シグナル伝達は RANK を発現する隣接細胞への細胞間相互作用に依存しており、RANK はその後 NFKB を活性化し、細胞周期の調節、つまり増殖、分化、アポトーシスを通じて細胞の活性化を調節します。 RANKL-RANK 相互作用は、RANKL に結合してそのシグナル伝達を阻害する内因性分泌タンパク質であるオステオプロテゲリン (OPG) によって変更されます。

RANK/RANKL は、破骨細胞の分化を促進する TRAF を介したキナーゼ カスケードのネットワークをトリガーします。 RANKL は骨芽細胞に発現し、その受容体、Rank は前破骨細胞に発現します。 RANKL の発現は、IL-1、IL-6、IL-11、IL-17、TNF-α、ビタミン D、Ca2+、副甲状腺、グルココルチコイド、プロスタグランジン E2、免疫抑制薬などの多くの要因によって刺激されます。 TGF-αによってダウンレギュレートされます。 RANK/RANKL 相互作用は、多核成熟破骨細胞の分化と形成を誘導し、骨吸収を引き起こします。 3 番目のタンパク質アゴニストであるオステオプロテゲリン (OPG) も骨芽細胞によって産生され、前破骨細胞分化プロセスに阻害効果を及ぼすことが知られています。 オステオプロテゲリン結合タンパク質 (OPGbp) としても知られる RANKL に結合することにより、OPG は RANK/RANKL 相互作用とその後の破骨細胞形成を阻害します。 したがって、OPG は非常に効果的な抗吸収剤です。 また、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド (TRAIL) のおとり受容体としても機能し、このリガンドのアポトーシス効果をブロックすることで細胞の生存を増加させます。 マウスにおける OPG の過剰発現が重度の大理石骨病を引き起こし、OPG ヌル マウスが骨粗鬆症であるという事実は、OPG の生理学的重要性を証明しています。 RANK または RANKL の欠如は、マウスの大理石骨病を誘発します。

したがって、RANK/RANKL システムは、骨吸収細胞 (破骨細胞) の活性化に不可欠です。 骨格では、骨合成細胞 (骨芽細胞) が RANKL を発現し、これが未熟な破骨細胞の RANK にシグナルを送ります。 これにより、細胞の増殖と活性化が誘導され、細胞の増殖と骨吸収が始まります。 OPG は骨の体細胞によって産生され、この産生は性ホルモン、TGF-B およびその他のさまざまな物質によって調節されます。 現在、RANKL に対するヒト製組換え抗体であるデノスマブは、RANKL シグナル伝達を阻害し、ヒトの骨吸収を抑えるため、骨粗鬆症の治療に使用されています。 RANKL シグナル伝達には、授乳と免疫応答に関与する、健康なヒトにおける既知の追加機能が 2 つだけあります。

研究者は、RANKL、RANK、および OPG が、ヒトの精巣で RNA レベルとタンパク質レベルの両方で発現していることを示すデータを持っています。 セルトリ細胞は RANKL を発現し、生殖細胞は RANK を発現し、尿細管周囲細胞は OPG を発現します。 通常、RANKL は NFKB を活性化し、雄の性腺におけるこの経路の活性化は、精巣細胞が増殖するか精巣でアポトーシスを起こすかを調節するようです。 研究者らの機能モデルからの in vitro、ex vivo、および in vivo データは、この提案を支持しており、したがって、この経路は生殖細胞増殖の新しい調節因子であると思われます。

精液の質の低下は、男性不妊の主な要因です。 精液の質は、受精を達成する精子の能力の間接的な尺度です。 男性の生殖能力の評価は、精液分析によって評価されます。 精液分析は特定の特性を評価し、精子の質を評価するために測定される最も一般的な変数は、精子の数、運動性、および形態です。

精液中に精子がない男性に対する治療法はなく、不妊男性の精子数を増加させる薬剤さえありません.は、デノスマブ治療の新しい適応症を強調しています。

したがって、研究者は、この小規模な前向き介入研究で、ヒトにおけるデノスマブによるRANKLの阻害が精子の生産と精液の質を増加させるかどうかをテストします.

15 人の不妊男性を招待して詳細なスクリーニングを行い、予定されている 12 人の不妊男性の包含と研究の完了を確保します。

生物統計学的分析

すべての分析は、Good Clinical Practiceガイドラインと、1日目に最初の薬を投与されたすべての患者を含む、治療意図のある集団での一次分析に従って実行されます。 2 つの方法でデータを分析します。 一次分析は、介入後の結果変数と比較したベースライン値に従って続行されます。 二次分析は、事前定義された一次および二次エンドポイントに関連するサブグループ分析に従って男性を層別化することに基づいています。

データ分析と品質 このプロトコルの主要なエンドポイントは、精子の総数、精子濃度、それに続く進行性および運動性精子の数、形態学的に正常な精子、精子の運動性、進行性運動性および形態学によって評価される精子生産の変化であり、これらは以下によって比較されます。対応のある t 検定。 複数の副次評価項目が存在しますが、最初の調査では、次の副次評価項目の変化に焦点を当てます: 精子 DFI、FSH、インヒビン B、血清 OPG、RANKL、OPG、ビタミン D、およびカルシウム恒常性。 1日目の訪問後、180日目の訪問前に参加を終了した被験者は、精液と血液サンプルを提供した最後の日までのデータ分析に含まれます。 たまにしか精液サンプルを提供しない男性、または訪問時にデータが欠落している男性は、分析に含まれます. プロトコルの基準を満たさない男性は分析から除外されます。 摂氏 38.5 度を超える発熱のある男性は、発熱エピソードの 3 か月後まで分析に含まれません。 禁欲期間が 24 時間未満、または精液量が 1.5 ml 未満の精液サンプルは分析に含まれません。 これらの値は、分析のために繰り越されます。 5% の有意水準が使用されます。 一次分析では、Bonferronu-Holm p 値補正が追加で計算されます。 二次分析では、複数のテスト補正は使用されません。 代わりに、複数のテスト状況を考慮して結果について説明します。

1. ベースラインと異なる時点の間の分析 最初のステップは、ベースラインと異なる時点の間の主要転帰の変化を比較することです。 精子形成は通常、男性で最大70日かかるため、すべての個々のタイムポイントの違いを判断し、80、120、および180日の平均を計算し、ベースライン値と比較して、精子形成の全長に対するRANKL阻害の影響を判断します. この分析は、グループ間に有意差があるかどうかを示します。 繰り返し測定される結果については、グループ間の各結果の推定勾配または変化率を比較する必要があります。 混合モデルにより、各男性からのベースライン-1 日目-80 日目-180 日目の反復観察間の相関関係をパラメータ推定に適切に組み込むことができます。 ベースラインと 180 日目に測定されたすべてのエンドポイントについて、対応のある t 検定を使用して、グループ間に有意差があるかどうかを評価し、各グループ内の平均変化がゼロと有意に異なるかどうかを判断します。 どちらの場合も、データはモデルの仮定を満たすために必要に応じて変換されます。 その後、季節、BMI、喫煙、禁酒期間、射精から運動性評価までの時間、発熱などの関連する交絡因子を使用して重回帰を使用して同じ分析を行い、結果が変わるかどうかを確認します。 1日目、80日目、180日目のt検定または他のパラメトリック検定と比較して、ウィルコクソン・マン・ホイットニー検定などのノンパラメトリック検定を使用してグループを比較します。 バイナリ結果の場合、データは、関連する交絡因子を調整した条件付きロジスティック回帰分析によって2つのグループ間で比較されます（有意にp <0.05関連していると定義されます）。
2. サブグループへの層別化後の分析 被験者は、BMI、精液の質、血清RANKL、OPG、カルシウム、PTH、オステオカルシン、またはスクリーニング日に評価された他の骨因子に従ってグループ化されます。 サブグループ分析は、通常の臨床診療と、臨床 (BMI <25、25-30、>30 など)、三分位数、または最高/最低対ベースラインのままの適切なグループの層別化に従って行われます。 分析は、介入後のすべての訪問のベースラインおよび平均/中央値を使用して、80、120、180日目の訪問の平均/中央値に加えて、ベースラインと比較して各時点で実行されます。