TNFSF11 gátlás és termékenység: prospektív tanulmány

Az NF-kB ligandum (RANKL) rendszer receptor aktivátorát fontosnak tartják a csont homeosztázisában. A RANKL három izoformában létezik, és az összes izoforma hatása egy specifikus receptorhoz (az NF-KB receptor aktivátorához (RANK)) való kötődésen keresztül közvetítődik. A RANKL túlnyomórészt transzmembrán fehérjeként található meg, ezért a jelátvitel a RANK-ot expresszáló szomszédos sejttel való kölcsönhatástól függ, amely ezt követően aktiválja az NFKB-t, és szabályozza a sejtaktivációt a sejtciklus szabályozása révén, azaz a proliferációt, a differenciálódást és az apoptózist. A RANKL-RANK kölcsönhatást az osteoprotegerin (OPG) módosítja, amely egy endogén szekretált fehérje, amely megköti a RANKL-t és gátolja annak jelátvitelét.

A RANK/RANKL a TRAF által közvetített kinázkaszkádok hálózatát váltja ki, amelyek elősegítik az oszteoklasztok differenciálódását. A RANKL az oszteoblaszt sejteken, receptora, a Rank pedig a pre-oszteoklasztikus sejteken expresszálódik. A RANKL expresszióját számos tényező stimulálja, mint például az IL-1, IL-6, IL-11, IL-17, TNF-α, D-vitamin, Ca2+, mellékpajzsmirigy, glükokortikoidok, prosztaglandin E2 és immunszuppresszív szerek. a TGF-α leszabályozza. A RANK/RANKL interakció differenciálódását és többmagvú érett oszteoklasztok képződését indukálja, csontreszorpciót okozva. A harmadik fehérje agonistát, az oszteoprotegerint (OPG) szintén oszteoblasztok termelik, és ismert, hogy gátló hatást fejt ki a pre-oszteoklasztikus differenciálódási folyamatra. Az oszteoprotegerin kötő fehérjeként (OPGbp) is ismert RANKL-hez kötődve az OPG gátolja a RANK/RANKL kölcsönhatást és az azt követő oszteoklasztogenezist. Az OPG tehát nagyon hatékony reszorpcióellenes szer. A tumor nekrózis faktorral kapcsolatos apoptózist indukáló ligandum (TRAIL) csali receptoraként is szolgál, és növeli a sejtek túlélését azáltal, hogy blokkolja e ligandum apoptotikus hatását. Az a tény, hogy az OPG túlzott expressziója egerekben súlyos osteopetrosist eredményez, és hogy az OPG-null egerek oszteoporózisban szenvednek, az OPG fiziológiai fontosságáról tanúskodik. A RANK vagy RANKL hiánya egerekben osteopetrosist indukál.

Így a RANK/RANKL rendszer létfontosságú a csontreszorpciós sejtek (oszteoklasztok) aktiválásához. A csontvázban a csontszintetizáló sejtek (oszteoblasztok) RANKL-t expresszálnak, amely az éretlen oszteoklasztokon a RANK felé jelez. Ez indukálja azoknak a sejteknek a proliferációját és aktiválását, amelyek elkezdenek szaporodni és felszívni a csontot. Az OPG-t a csont szomatikus sejtjei termelik, és ezt a termelést a nemi hormonok, a TGF-B és számos egyéb anyag szabályozzák. Manapság a RANKL elleni, ember által előállított rekombináns antitest, a Denosumab a csontritkulás kezelésére szolgál, mivel gátolja a RANKL jelátvitelt, és kevésbé okoz csontreszorpciót emberben. A RANKL jelátvitelnek csak két további ismert további funkciója van egészséges emberekben, ahol részt vesz a laktációban és az immunválaszban.

A kutatók olyan adatokkal rendelkeznek, amelyek azt mutatják, hogy a RANKL, RANK és OPG RNS és fehérje szinten is expresszálódik a humán herében. A Sertoli sejtek RANKL-t, míg a csírasejtek RANK-ot, a peritubuláris sejtek pedig OPG-t expresszálnak. Normális esetben a RANKL aktiválja az NFKB-t, és úgy tűnik, hogy ennek az útvonalnak az aktiválása a férfi nemi mirigyben szabályozza, hogy a heresejtek szaporodnak-e vagy apoptózison mennek keresztül a herében. A kutatók funkcionális modellekből származó in vitro, ex vivo és in vivo adatai alátámasztják ezt a felvetést, és ezért úgy tűnik, hogy ez az útvonal a csírasejt-proliferáció új szabályozója.

A sperma minőségének csökkenése a férfi meddőség egyik fő tényezője. A sperma minősége a spermium megtermékenyítési képességének közvetett mértéke. A férfiak termékenységi potenciáljának értékelését spermaanalízissel értékelik. A spermaelemzés bizonyos jellemzőket értékel, és a spermium minőségének értékelésére leggyakrabban mért változók a következők: spermaszám, motilitás és morfológia.

Nincs kezelés olyan férfiak számára, akiknek nincs spermium az ejakulátumában, sőt olyan gyógyszer sem létezik, amely növelheti a spermiumok számát meddő férfiakban. Ezért azt javasoljuk, hogy a RANKL elleni antitestek, például a Denosumab új kezelési lehetőségként használhatók a férfi meddőség kezelésére. rávilágít a Denosumab-kezelés új javallatára.

A kutatók ezért megvizsgálják, hogy a RANKL denosumab általi gátlása emberekben növeli-e a spermiumtermelést és a sperma minőségét ebben a kis prospektív beavatkozási vizsgálatban.

15 meddő férfit fogunk meghívni részletes szűrésre, hogy biztosítsuk a várhatóan 12 meddő férfi bevonását és a vizsgálat elvégzését.

BIOSTATISZTIKAI ELEMZÉS

Az összes elemzést a Helyes Klinikai Gyakorlat iránymutatásai és a kezelési szándékú populáció elsődleges elemzései szerint végzik el, amelybe minden olyan beteg beletartozott, aki az 1. napon megkapta az első adag gyógyszert. Az adatokat kétféleképpen elemezzük. Az elsődleges elemzés a kiindulási értékeknek megfelelően történik, összehasonlítva a beavatkozás utáni kimeneti változókkal. A másodlagos elemzés a férfiaknak az előre meghatározott elsődleges és másodlagos végpontokhoz viszonyított alcsoport-elemzések szerinti rétegezésén fog alapulni.

Az adatok elemzése és minősége Ennek a protokollnak az elsődleges végpontja a spermiumtermelésben bekövetkezett változások, amelyeket az összes spermiumszám, a spermiumkoncentráció, majd a progresszív és mozgékony spermiumok száma, a morfológiailag normális spermiumok száma, a spermiumok mozgékonysága, a progresszív motilitás és a morfológia alapján értékelnek, amelyeket páros t-próba. Több másodlagos végpont létezik, de a kezdeti vizsgálat során a következő másodlagos végpontok változásaira kell összpontosítani: spermium DFI, FSH, inhibin B, szérum OPG, RANKL, OPG, D-vitamin és kalcium homeosztázis. Azokat az alanyokat, akik az első vizit után, de a 180. vizitnap előtt abbahagyják a részvételt, a sperma és a vérminta utolsó napjáig bevonják az adatelemzésbe. Azok a férfiak, akik csak alkalmanként szállítanak spermamintát, vagy bármely látogatás alkalmával hiányoznak az adatok, továbbra is beletartoznak az elemzésbe. Azok a férfiak, akik nem felelnek meg a protokollban szereplő kritériumoknak, kizárásra kerülnek az elemzésből. A 38,5 Celsius-fok feletti lázban szenvedő férfiakat a lázas epizód után 3 hónapig nem vonják be az elemzésbe. A 24 óránál rövidebb absztinenciaidővel vagy 1,5 ml-nél kisebb spermatérfogatú spermamintákat nem veszik figyelembe az elemzésekben. Ezeket az értékeket azután továbbvisszük elemzésekhez. 5%-os szignifikanciaszintet alkalmazunk. Az elsődleges elemzésekhez Bonferronu-Holm p-érték korrekciót is számítanak. A másodlagos elemzéshez nem alkalmazunk többszörös tesztkorrekciót. Ehelyett az eredményeket tárgyaljuk, tekintettel a többszörös tesztelési helyzetekre.

1. Az alapvonal és a különböző időpontok közötti elemzések Az első lépés az lesz, hogy összehasonlítjuk az elsődleges eredmények változásait az alapvonal és a különböző időpontok között. A spermatogenezis általában 70 napig tart férfiakban, ezért meghatározzuk az összes egyedi időpont különbségét, és kiszámítjuk a 80., 120. és 180. nap átlagát, és összehasonlítjuk az alapértékekkel, hogy meghatározzuk a RANKL-gátlás hatását a spermatogenezis teljes hosszára. Ez az elemzés megmutatja, hogy van-e szignifikáns különbség a csoportok között. Az ismételten mért eredmények esetében ez azt jelenti, hogy össze kell hasonlítani az egyes eredmények becsült meredekségét vagy változási sebességét a csoportok között. A vegyes modellek lehetővé teszik, hogy a korrelációt a kiindulási nap 1 nap 80 és 180 nap ismételt megfigyelései között megfelelően beépítsük a paraméterbecslésbe. Az alapvonalon és a 180. napon mért összes végpont esetében páros t-teszteket használnak annak értékelésére, hogy van-e szignifikáns különbség a csoportok között, és meghatározzák, hogy az egyes csoportokon belüli átlagos változás szignifikánsan eltér-e a nullától. Mindkét esetben az adatokat szükség szerint átalakítjuk, hogy megfeleljenek a modell feltevéseinek. Ezt követően ugyanazt az elemzést hajtják végre többszörös regresszió alkalmazásával olyan releváns zavaró tényezőkkel, mint az évszak, a BMI, a dohányzás, az absztinencia időtartama, az ejakulációtól a motilitás felméréséig eltelt idő, láz stb., hogy kiderüljön, hogy ez megváltoztatja-e az eredményeket Olyan mért eredmények esetében, amelyek nem mérhetők. összehasonlítva a t-teszttel vagy más paraméteres tesztekkel az 1., a 80. és a 180. napon, a csoportokat nem paraméteres tesztekkel, például Wilcoxon Mann-Whitney teszttel hasonlítjuk össze. A bináris eredményhez a két csoport adatait feltételes logisztikus-regressziós analízissel hasonlítják össze, a releváns zavaró tényezők kiigazításával (amely definíció szerint szignifikánsan p<0,05 társul).
2. Elemzések alcsoportokba bontás után Az alanyokat a BMI, a sperma minősége, a szérum RANKL, az OPG, a kalcium, a PTH, az oszteokalcin vagy a szűrés napján értékelt egyéb csontfaktorok alapján csoportosítják. Az alcsoport-analízis a normál klinikai gyakorlatnak megfelelően történik, és a megfelelő csoportokban a klinikai állapot (BMI <25, 25-30, >30 stb.), harmadfokú vagy legmagasabb/legalacsonyabb, illetve a kiindulási állapot szerinti fennmaradó csoportok szerinti rétegződést végzik. Elemzéseket végeznek minden egyes időponton a kiindulási értékkel összehasonlítva, a 80., 120., 180. látogatási nap átlaga/mediánja mellett, a beavatkozás utáni összes vizit kiindulási értékével és átlagával/mediánjával.