TNFSF11 Hamowanie i płodność: badanie prospektywne

Aktywator receptora układu ligandu NF-kB (RANKL) jest uważany za ważny dla homeostazy kości. RANKL występuje w trzech izoformach, a efekty wszystkich izoform są pośredniczone przez wiązanie się ze specyficznym receptorem (aktywator receptora NF-KB (RANK)). RANKL występuje głównie jako białko transbłonowe, a zatem sygnalizacja jest zależna od interakcji komórka-komórka z sąsiednią komórką wyrażającą RANK, która następnie aktywuje NFKB i reguluje aktywację komórkową poprzez regulację cyklu komórkowego, tj. proliferację, różnicowanie i apoptozę. Interakcja RANKL-RANK jest modyfikowana przez osteoprotegerynę (OPG), która jest endogennym wydzielanym białkiem, które wiąże RANKL i hamuje jego sygnalizację.

RANK/RANKL wyzwala sieć kaskad kinaz, w których pośredniczy TRAF, które promują różnicowanie osteoklastów. RANKL ulega ekspresji na komórkach osteoblastów, a jego receptor, Rank, na komórkach preosteoklastycznych. Ekspresja RANKL jest stymulowana przez szereg czynników, takich jak IL-1, IL-6, IL-11, IL-17, TNF-α, witamina D, Ca2+, przytarczyce, glikokortykosteroidy, prostaglandyna E2 oraz leki immunosupresyjne i jest regulowany w dół przez TGF-α. Oddziaływanie RANK/RANKL indukuje różnicowanie i tworzenie dojrzałych wielojądrzastych osteoklastów, powodując resorpcję kości. Trzeci agonista białka, osteoprotegeryna (OPG), jest również wytwarzany przez osteoblasty i wiadomo, że wywiera hamujący wpływ na proces różnicowania preosteoklastycznego. Wiążąc się z RANKL, znanym również jako białko wiążące osteoprotegerynę (OPGbp), OPG hamuje interakcję RANK/RANKL i późniejszą osteoklastogenezę. OPG jest więc bardzo skutecznym środkiem antyresorpcyjnym. Służy również jako receptor wabika dla ligandu indukującego apoptozę związanego z czynnikiem martwicy nowotworów (TRAIL) i zwiększa przeżywalność komórek poprzez blokowanie apoptotycznych efektów tego ligandu. Fakt, że nadekspresja OPG u myszy powoduje ciężką osteopetrozę i że myszy bez OPG są osteoporotyczne, świadczy o fizjologicznym znaczeniu OPG. Brak RANK lub RANKL indukuje osteopetrozę u myszy.

Zatem układ RANK/RANKL jest niezbędny do aktywacji komórek resorpujących kość (osteoklastów). W szkielecie komórki syntetyzujące kość (osteoblasty) wyrażają RANKL, który sygnalizuje RANK na niedojrzałych osteoklastach. To indukuje proliferację i aktywację komórek, które zaczynają się rozmnażać i resorpować kość. OPG jest wytwarzany przez komórki somatyczne kości, a produkcja ta jest regulowana przez hormony płciowe, TGF-B i różne inne substancje. Dzisiaj, rekombinowane przeciwciało przeciwko RANKL, wytwarzane przez człowieka, Denosumab jest stosowane w leczeniu osteoporozy, ponieważ hamuje sygnalizację RANKL i powoduje mniejszą resorpcję kości u ludzi. Sygnalizacja RANKL ma tylko dwie inne znane dodatkowe funkcje u zdrowych ludzi, gdzie bierze udział w laktacji i odpowiedzi immunologicznej.

Badacze dysponują danymi wskazującymi, że RANKL, RANK i OPG ulegają ekspresji zarówno na poziomie RNA, jak i białka w ludzkich jądrach. Komórki Sertoliego wyrażają RANKL, podczas gdy komórki rozrodcze wyrażają RANK, a komórki okołokanalikowe wyrażają OPG. Zwykle RANKL aktywuje NFKB, a aktywacja tego szlaku w męskich gonadach wydaje się regulować, czy komórki jądra proliferują, czy też przechodzą apoptozę w jądrze. Dane badaczy in vitro, ex vivo i in vivo z modeli funkcjonalnych potwierdzają tę sugestię, a zatem szlak ten wydaje się być nowym regulatorem proliferacji komórek rozrodczych.

Obniżona jakość nasienia jest głównym czynnikiem niepłodności męskiej. Jakość nasienia jest pośrednią miarą zdolności plemników do zapłodnienia. Ocena męskiego potencjału płodności jest oceniana na podstawie analizy nasienia. Analiza nasienia ocenia pewne cechy, a najczęstszymi zmiennymi mierzonymi w celu oceny jakości nasienia są: liczba plemników, ruchliwość i morfologia.

Nie ma leczenia dla mężczyzn bez plemników w ejakulacie ani nawet leku, który mógłby zwiększyć liczbę plemników u niepłodnych mężczyzn. Dlatego sugerujemy, że przeciwciała przeciwko RANKL, takie jak Denosumab, mogą być stosowane jako nowa opcja leczenia niepłodności męskiej, która zwraca uwagę na nowe wskazanie do leczenia denosumabem.

Badacze sprawdzą zatem, czy hamowanie RANKL przez denosumab u ludzi zwiększa produkcję plemników i jakość nasienia w tym małym prospektywnym badaniu interwencyjnym.

Zaprosimy 15 niepłodnych mężczyzn na szczegółowe badania przesiewowe w celu zapewnienia włączenia i ukończenia badań przewidywanych 12 niepłodnych mężczyzn

ANALIZA BIOSTATYSTYCZNA

Wszystkie analizy zostaną przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Dobrej Praktyki Klinicznej oraz podstawowe analizy w populacji planowanej do leczenia, która obejmowała wszystkich pacjentów, którzy otrzymali pierwszą dawkę leku w dniu 1. Przeanalizujemy dane na dwa sposoby. Analiza pierwotna zostanie przeprowadzona zgodnie z wartościami wyjściowymi w porównaniu ze zmiennymi wynikającymi po interwencji. Analiza wtórna będzie oparta na stratyfikacji mężczyzn zgodnie z analizami podgrup w odniesieniu do predefiniowanych pierwszorzędowych i drugorzędowych punktów końcowych.

Analiza danych i jakość Głównymi punktami końcowymi niniejszego protokołu będą zmiany w produkcji plemników oceniane na podstawie całkowitej liczby plemników, stężenia plemników, a następnie liczby plemników postępowych i ruchliwych, plemników prawidłowych morfologicznie, ruchliwości plemników, ruchliwości progresywnej i morfologii, które zostaną porównane za pomocą sparowany test t. Istnieje wiele drugorzędowych punktów końcowych, ale wstępne badanie skupi się na zmianach następujących drugorzędowych punktów końcowych: DFI plemników, FSH, inhibina B, OPG w surowicy, RANKL, OPG, witamina D i homeostaza wapnia. Pacjenci, którzy zakończą udział w wizycie po 1. dniu wizyty, ale przed 180. dniem wizyty, zostaną włączeni do analizy danych do ostatniego dnia, w którym oddali nasienie i próbkę krwi. Mężczyźni, którzy dostarczają próbki nasienia tylko okazjonalnie lub w przypadku których brakuje danych podczas dowolnej wizyty, nadal będą uwzględniani w analizie. Mężczyźni niespełniający kryteriów zawartych w protokole zostaną wykluczeni z analizy. Mężczyźni z gorączką powyżej 38,5 st. C nie będą uwzględniani w analizach do 3 miesięcy po epizodzie gorączki. Próbki nasienia pobrane przy okresie abstynencji krótszym niż 24 godziny lub z objętością nasienia < 1,5 ml nie będą uwzględniane w analizach. Wartości te zostaną następnie przeniesione do analiz. Zastosowano poziom istotności 5%. W przypadku analiz pierwotnych dodatkowo obliczana jest poprawka wartości p Bonferronu-Holma. Do analizy wtórnej nie stosuje się wielokrotnej korekty testu. Zamiast tego wyniki są omawiane w świetle wielu sytuacji testowych.

1. Analizy między punktem wyjściowym a różnymi punktami czasowymi Pierwszym krokiem będzie porównanie zmian w głównych wynikach między punktem wyjściowym a różnymi punktami czasowymi. Spermatogeneza zwykle trwa do 70 dni u mężczyzn, dlatego określimy różnicę dla wszystkich poszczególnych punktów czasowych i obliczymy średnią dla dni 80, 120 i 180 oraz porównamy z wartościami wyjściowymi, aby określić wpływ hamowania RANKL na całą długość spermatogenezy. Ta analiza pokaże, czy istnieje znacząca różnica między grupami. W przypadku wyników mierzonych wielokrotnie będzie to wymagało porównania oszacowanych nachyleń lub tempa zmian każdego wyniku między grupami. Modele mieszane pozwalają na odpowiednie włączenie korelacji między powtarzanymi obserwacjami od linii bazowej-dzień 1-dzień 80-dzień 180 od każdego mężczyzny do oszacowania parametrów. Dla wszystkich punktów końcowych mierzonych na linii podstawowej iw dniu 180, sparowane testy t zostaną wykorzystane do oceny, czy istnieje istotna różnica między grupami i określenia, czy średnia zmiana w każdej grupie różni się znacząco od zera. W obu przypadkach dane zostaną przekształcone w miarę potrzeb, aby spełnić założenia modelu. Następnie ta sama analiza zostanie przeprowadzona przy użyciu regresji wielokrotnej z odpowiednimi czynnikami zakłócającymi, takimi jak pora roku, BMI, palenie tytoniu, czas trwania abstynencji, czas od wytrysku do oceny ruchliwości, gorączka itp., aby sprawdzić, czy zmienia to wyniki W przypadku zmierzonych wyników, których nie można w porównaniu z testem t lub innymi testami parametrycznymi w dniu 1, dniu 80 i dniu 180, grupy zostaną porównane przy użyciu testów nieparametrycznych, takich jak test Wilcoxona Manna-Whitneya. W przypadku wyniku binarnego dane zostaną porównane między dwiema grupami za pomocą warunkowej analizy logistyczno-regresyjnej z korektą pod kątem odpowiednich czynników zakłócających (zdefiniowanych jako istotnie powiązane p<0,05).
2. Analizy po rozwarstwieniu na podgrupy Pacjenci zostaną podzieleni na grupy według BMI, jakości nasienia, RANKL w surowicy, OPG, wapnia, PTH, osteokalcyny lub innych czynników kostnych ocenianych w dniu skriningu. Analiza podgrup zostanie przeprowadzona zgodnie z normalną praktyką kliniczną i podziałem na odpowiednie grupy zgodnie z wartościami klinicznymi (BMI <25, 25-30, >30 itd.), tercylami lub najwyższą/najniższą wartością względem pozostawania na linii podstawowej. Analizy zostaną przeprowadzone dla każdego czasu w porównaniu z wartością wyjściową, oprócz średniej/mediany dnia wizyty 80, 120, 180 z wartością wyjściową i średnią/medianą wszystkich wizyt po interwencji.