Inhibition du TNFSF11 et fertilité : une étude prospective

L'activateur du récepteur du système ligand NF-kB (RANKL) est considéré comme important pour l'homéostasie osseuse. RANKL existe sous trois isoformes et les effets de toutes les isoformes sont médiés par la liaison à un récepteur spécifique (récepteur activateur de NF-KB (RANK)). RANKL se trouve principalement sous forme de protéine transmembranaire et la signalisation dépend donc de l'interaction cellule-cellule avec une cellule voisine exprimant RANK qui active ensuite NFKB et régule l'activation cellulaire par la régulation du cycle cellulaire, c'est-à-dire la prolifération, la différenciation et l'apoptose. L'interaction RANKL-RANK est modifiée par l'ostéoprotégérine (OPG), qui est une protéine sécrétée endogène qui se lie à RANKL et inhibe sa signalisation.

RANK/RANKL déclenche un réseau de cascades de kinases médiées par TRAF qui favorisent la différenciation des ostéoclastes. RANKL est exprimé sur les cellules ostéoblastes et son récepteur, Rank, sur les cellules pré-ostéoclastiques. L'expression de RANKL est stimulée par un certain nombre de facteurs, tels que l'IL-1, l'IL-6, l'IL-11, l'IL-17, le TNF-α, la vitamine D, le Ca2+, la parathyroïde, les glucocorticoïdes, la prostaglandine E2 et les médicaments immunosuppresseurs, et est régulé à la baisse par le TGF-α. L'interaction RANK/RANKL induit la différenciation et la formation d'ostéoclastes matures multinucléés, provoquant une résorption osseuse. Le troisième agoniste protéique, l'ostéoprotégérine (OPG), est également produit par les ostéoblastes et est connu pour exercer un effet inhibiteur sur le processus de différenciation pré-ostéoclastique. En se liant à RANKL, également connu sous le nom de protéine de liaison à l'ostéoprotégérine (OPGbp), l'OPG inhibe l'interaction RANK/RANKL et l'ostéoclastogenèse qui en résulte. L'OPG est donc un agent anti-résorptif très efficace. Il sert également de récepteur leurre pour le ligand induisant l'apoptose lié au facteur de nécrose tumorale (TRAIL) et augmente la survie cellulaire en bloquant les effets apoptotiques de ce ligand. Le fait que la surexpression de l'OPG chez la souris entraîne une ostéopétrose sévère et que les souris OPG-null soient ostéoporotiques témoigne de l'importance physiologique de l'OPG. L'absence de RANK ou RANKL induit une ostéopétrose chez la souris.

Ainsi, le système RANK/RANKL est vital pour l'activation des cellules de résorption osseuse (ostéoclastes). Dans le squelette, les cellules de synthèse osseuse (ostéoblastes) expriment RANKL qui signale RANK sur les ostéoclastes immatures. Cela induit la prolifération et l'activation des cellules qui commencent à proliférer et à résorber l'os. L'OPG est produit par les cellules somatiques de l'os et cette production est régulée par les hormones sexuelles, le TGF-B et diverses autres substances. Aujourd'hui, un anticorps recombinant fabriqué par l'homme contre RANKL, Denosumab est utilisé pour traiter l'ostéoporose car il inhibe la signalisation RANKL et provoque moins de résorption osseuse chez l'homme. La signalisation RANKL n'a que deux autres fonctions supplémentaires connues chez l'homme en bonne santé où elle est impliquée dans la lactation et la réponse immunitaire.

Les chercheurs disposent de données montrant que RANKL, RANK et OPG sont exprimés à la fois au niveau de l'ARN et des protéines dans les testicules humains. Les cellules de Sertoli expriment RANKL, tandis que les cellules germinales expriment RANK et les cellules péritubulaires expriment OPG. Normalement, RANKL active NFKB et l'activation de cette voie dans la gonade mâle semble réguler si les cellules testiculaires prolifèrent ou subissent une apoptose dans le testicule. Les données in vitro, ex vivo et in vivo des chercheurs provenant de modèles fonctionnels appuient cette suggestion et cette voie apparaît donc comme un nouveau régulateur de la prolifération des cellules germinales.

La diminution de la qualité du sperme est un facteur majeur d'infertilité masculine. La qualité du sperme est une mesure indirecte de la capacité du sperme à accomplir la fécondation. L'évaluation du potentiel de fertilité masculine est évaluée par l'analyse du sperme. L'analyse du sperme évalue certaines caractéristiques et les variables les plus couramment mesurées pour évaluer la qualité du sperme sont : le nombre de spermatozoïdes, la motilité et la morphologie.

Il n'y a pas de traitement pour les hommes sans spermatozoïdes dans l'éjaculat ni même un médicament qui peut augmenter le nombre de spermatozoïdes chez les hommes infertiles. met en évidence une nouvelle indication pour le traitement Denosumab.

Les enquêteurs testeront donc si l'inhibition de RANKL par Denosumab chez l'homme augmente la production de sperme et la qualité du sperme dans cette petite étude d'intervention prospective.

Nous inviterons 15 hommes infertiles pour un dépistage détaillé afin de garantir l'inclusion et l'achèvement de l'étude des 12 hommes infertiles prévus

ANALYSE BIOSTATISTIQUE

Toutes les analyses seront effectuées conformément aux directives de bonnes pratiques cliniques et aux analyses primaires dans la population en intention de traiter, qui comprenait tous les patients ayant reçu la première dose de médicament le jour 1. Nous analyserons les données de deux manières. L'analyse principale se déroulera en fonction des valeurs de référence par rapport aux variables de résultats après l'intervention. L'analyse secondaire sera basée sur la stratification des hommes selon des analyses de sous-groupes par rapport aux critères de jugement primaires et secondaires prédéfinis.

Analyse et qualité des données Les principaux critères d'évaluation de ce protocole seront les changements dans la production de spermatozoïdes évalués par le nombre total de spermatozoïdes, la concentration de spermatozoïdes suivis du nombre de spermatozoïdes progressifs et mobiles, les spermatozoïdes morphologiquement normaux, la motilité des spermatozoïdes, la motilité progressive et la morphologie qui seront comparés par test t apparié. Il existe plusieurs critères d'évaluation secondaires, mais pour l'étude initiale, l'accent sera mis sur les modifications des critères d'évaluation secondaires suivants : sperme DFI, FSH, inhibine B, OPG sérique, RANKL, OPG, vitamine D et homéostasie du calcium. Les sujets qui mettent fin à leur participation après le jour de la visite 1 mais avant le jour de la visite 180 seront inclus pour l'analyse des données jusqu'au dernier jour où ils ont fourni du sperme et un échantillon de sang. Les hommes qui ne livrent qu'occasionnellement des échantillons de sperme ou qui ont des données manquantes lors d'une visite seront toujours inclus dans l'analyse. Les hommes qui ne répondent pas aux critères du protocole seront exclus de l'analyse. Les hommes ayant une fièvre supérieure à 38,5 degrés Celsius ne seront pas inclus dans les analyses jusqu'à 3 mois après l'épisode de fièvre. Les échantillons de sperme obtenus avec une période d'abstinence inférieure à 24 heures ou avec un volume de sperme < 1,5 ml ne seront pas inclus dans les analyses. Ces valeurs seront ensuite reportées pour les analyses. Un seuil de signification de 5 % est utilisé. Pour les analyses primaires, la correction de la valeur p de Bonferronu-Holm est calculée en plus. Pour l'analyse secondaire, aucune correction de test multiple n'est utilisée. Au lieu de cela, les résultats sont discutés compte tenu des multiples situations de test.

1. Analyses entre la ligne de base par rapport à différents points dans le temps La première étape consistera à comparer les changements dans les critères de jugement principaux entre la ligne de base et les différents points dans le temps. La spermatogenèse prend normalement jusqu'à 70 jours chez les hommes et nous allons donc déterminer la différence entre tous les points de temps individuels et calculer la moyenne pour les jours 80, 120 et 180 et comparer avec les valeurs de base pour déterminer l'effet de l'inhibition de RANKL sur toute la durée de la spermatogenèse. Cette analyse montrera s'il existe une différence significative entre les groupes. Pour les résultats mesurés à plusieurs reprises, cela impliquera de comparer les pentes estimées, ou les taux de changement, de chaque résultat entre les groupes. Les modèles mixtes permettent d'incorporer de manière appropriée dans l'estimation des paramètres la corrélation entre les observations répétées ligne de base-jour 1-jour 80-jour 180 de chaque homme. Pour tous les paramètres mesurés au départ et au jour 180, des tests t appariés seront utilisés pour évaluer s'il existe une différence significative entre les groupes et déterminer si le changement moyen au sein de chaque groupe diffère significativement de zéro. Dans les deux cas, les données seront transformées au besoin pour répondre aux hypothèses du modèle. Ensuite, la même analyse sera effectuée en utilisant une régression multiple avec des facteurs de confusion pertinents tels que la saison, l'IMC, le tabagisme, la durée de l'abstinence, le temps écoulé entre l'éjaculation et l'évaluation de la motilité, la fièvre, etc. pour voir si cela modifie les résultats Pour les résultats mesurés qui ne peuvent pas être par rapport au test t ou à d'autres tests paramétriques au jour 1, au jour 80 et au jour 180, les groupes seront comparés à l'aide de tests non paramétriques tels que le test de Wilcoxon Mann-Whitney. Pour le résultat binaire, les données seront comparées entre les deux groupes au moyen d'une analyse de régression logistique conditionnelle avec ajustement pour les facteurs de confusion pertinents (définis comme étant significativement associés à p<0,05).
2. Analyses après stratification en sous-groupes Les sujets seront regroupés en fonction de leur IMC, qualité du sperme, RANKL sérique, OPG, calcium, PTH, ostéocalcine ou autres facteurs osseux évalués au jour du dépistage. Les analyses de sous-groupes seront conformes à la pratique clinique normale et à la stratification en groupes appropriés en fonction de la clinique (IMC <25, 25-30, >30, etc.), des tertiles ou du plus haut/du plus bas par rapport au reste au départ. Des analyses seront effectuées sur chaque timpeoint par rapport à la ligne de base en plus de la moyenne/médiane des jours de visite 80, 120, 180 avec la ligne de base et la moyenne/médiane de toutes les visites après l'intervention.