TNFSF11 억제 및 생식력: 전향적 연구

NF-kB 리간드(RANKL) 시스템의 수용체 활성제는 뼈 항상성에 중요한 것으로 간주됩니다. RANKL은 3가지 이소폼으로 존재하며 모든 이소폼의 효과는 특정 수용체(NF-KB의 수용체 활성화 인자(RANK))에 대한 결합을 통해 매개됩니다. RANKL은 주로 막관통 단백질로 발견되며 따라서 신호 전달은 NFKB를 활성화하고 세포 주기, 즉 증식, 분화 및 세포사멸의 조절을 통해 세포 활성화를 조절하는 RANK를 발현하는 이웃 세포에 대한 세포-세포 상호작용에 의존합니다. RANKL-RANK 상호작용은 RANKL에 결합하여 신호 전달을 억제하는 내인성 분비 단백질인 오스테오프로테게린(OPG)에 의해 변형됩니다.

RANK/RANKL은 파골 세포 분화를 촉진하는 TRAF 매개 키나아제 캐스케이드 네트워크를 트리거합니다. RANKL은 조골 세포에서 발현되고 그 수용체인 Rank는 파골 전 세포에서 발현됩니다. RANKL 발현은 IL-1, IL-6, IL-11, IL-17, TNF-α, 비타민 D, Ca2+, 부갑상선, 글루코코르티코이드, 프로스타글란딘 E2 및 면역억제제와 같은 여러 인자에 의해 자극되며, TGF-α에 의해 하향 조절됩니다. RANK/RANKL 상호작용은 다핵성숙 파골세포의 분화 및 형성을 유도하여 골흡수를 유발한다. 세 번째 단백질 작용제인 osteoprotegerin(OPG) 역시 조골세포에서 생산되며 파골 전 분화 과정에 억제 효과를 발휘하는 것으로 알려져 있습니다. OPGbp(osteoprotegerin binding protein)로도 알려진 RANKL에 결합함으로써 OPG는 RANK/RANKL 상호작용과 그에 따른 파골세포 형성을 억제합니다. 따라서 OPG는 매우 효율적인 항흡수제입니다. 또한 TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)에 대한 미끼 수용체 역할을 하며 이 리간드의 세포사멸 효과를 차단하여 세포 생존을 증가시킵니다. 생쥐에서 OPG의 과발현이 심각한 골화석증을 초래하고 OPG-null 생쥐가 골다공증을 일으킨다는 사실은 OPG의 생리학적 중요성에 대한 증거입니다. RANK 또는 RANKL의 부족은 생쥐에서 골석화증을 유발합니다.

따라서 RANK/RANKL 시스템은 골 재흡수 세포(파골 세포)의 활성화에 필수적입니다. 골격에서 뼈 합성 세포(골아세포)는 미성숙 파골세포의 RANK에 신호를 보내는 RANKL을 발현합니다. 이것은 그들이 증식하고 뼈를 흡수하기 시작하는 세포의 증식과 활성화를 유도합니다. OPG는 뼈의 체세포에서 생성되며 이 생성은 성 호르몬, TGF-B 및 기타 다양한 물질에 의해 조절됩니다. 오늘날 RANKL에 대한 인간이 만든 재조합 항체인 데노수맙은 RANKL 신호를 억제하고 인간의 골 흡수를 덜 일으키기 때문에 골다공증을 치료하는 데 사용됩니다. RANKL 신호는 수유 및 면역 반응에 관여하는 건강한 사람에게 두 가지 알려진 추가 기능만 있습니다.

연구자들은 RANKL, RANK 및 OPG가 인간 고환에서 RNA 및 단백질 수준 모두에서 발현된다는 것을 보여주는 데이터를 가지고 있습니다. Sertoli 세포는 RANKL을 발현하는 반면, 생식 세포는 RANK를 발현하고 세뇨관 주위 세포는 OPG를 발현합니다. 일반적으로 RANKL은 NFKB를 활성화하고 남성 생식선에서 이 경로의 활성화는 고환 세포가 증식하거나 고환에서 세포 사멸을 겪는지 여부를 조절하는 것으로 보입니다. 연구원의 기능적 모델에서 얻은 시험관 내, 생체 외 및 생체 내 데이터는 이러한 제안을 뒷받침하며 따라서 이 경로는 생식 세포 증식의 새로운 조절자인 것으로 보입니다.

정액의 질 감소는 남성 불임의 주요 요인입니다. 정액의 질은 수정을 달성하는 정자의 능력을 간접적으로 측정하는 것입니다. 남성 생식력의 평가는 정액 분석으로 평가합니다. 정액 분석은 특정 특성을 평가하며 정자의 품질을 평가하기 위해 측정되는 가장 일반적인 변수는 정자 수, 운동성 및 형태입니다.

사정에 정자가 없는 남성에 대한 치료법이나 심지어 불임 남성의 정자 수를 증가시킬 수 있는 약물도 없습니다. 따라서 우리는 데노수맙과 같은 RANKL에 대한 항체가 남성 불임에 대한 새로운 치료 옵션으로 사용될 수 있다고 제안합니다. Denosumab 치료에 대한 새로운 적응증을 강조합니다.

따라서 조사관은 이 소규모 전향적 개입 연구에서 인간의 데노수맙에 의한 RANKL 억제가 정자 생산과 정액의 질을 증가시키는지 여부를 테스트할 것입니다.

우리는 예상되는 12명의 불임 남성의 포함 및 연구 완료를 보장하기 위해 상세한 스크리닝을 위해 15명의 불임 남성을 초대할 것입니다.

생물통계학적 분석

모든 분석은 Good Clinical Practice 지침과 1일차에 첫 번째 약을 투여받은 모든 환자를 포함한 치료 의도 모집단의 1차 분석에 따라 수행됩니다. 우리는 두 가지 방법으로 데이터를 분석할 것입니다. 1차 분석은 개입 후 결과 변수와 비교한 기준 값에 따라 진행됩니다. 2차 분석은 미리 정의된 1차 및 2차 종점과 관련하여 하위 그룹 분석에 따라 남성을 계층화하는 것을 기반으로 합니다.

데이터 분석 및 품질 이 프로토콜의 1차 종점은 총 정자 수, 정자 농도, 진행성 및 운동성 정자 수, 형태학적으로 정상인 정자, 정자 운동성, 진행성 운동성 및 형태학으로 평가되는 정자 생산의 변화입니다. 페어링된 t-테스트. 여러 2차 평가변수가 존재하지만 초기 조사의 초점은 정자 DFI, FSH, Inhibin B, 혈청 OPG, RANKL, OPG, 비타민 D 및 칼슘 항상성과 같은 2차 평가변수의 변화에 ​​있습니다. 방문 1일 후부터 방문 180일 이전에 참여를 종료한 피험자는 정액 및 혈액 샘플을 제공한 마지막 날까지 데이터 분석에 포함됩니다. 때때로 정액 샘플을 제공하거나 방문 시 데이터가 누락된 남성도 여전히 분석에 포함됩니다. 프로토콜의 기준을 충족하지 않는 남성은 분석에서 제외됩니다. 섭씨 38.5도 이상의 발열이 있는 남성은 발열 에피소드 후 최대 3개월 동안 분석에 포함되지 않습니다. 금욕 기간이 24시간 미만이거나 정액 부피가 1.5ml 미만인 정액 샘플은 분석에 포함되지 않습니다. 그런 다음 해당 값은 분석을 위해 이월됩니다. 5%의 유의 수준이 사용됩니다. 1차 분석을 위해 Bonferronu-Holm p-값 보정이 추가로 계산됩니다. 2차 분석의 경우 다중 테스트 수정이 사용되지 않습니다. 대신 결과는 여러 테스트 상황을 고려하여 논의됩니다.

1. 기준선과 다른 시점 간의 분석 첫 번째 단계는 기준선과 다른 시점 간의 주요 결과의 변화를 비교하는 것입니다. 정자 형성은 일반적으로 남성에서 최대 70일이 걸리므로 모든 개별 시점의 차이를 결정하고 80, 120 및 180일의 평균을 계산하고 기준 값과 비교하여 정자 형성의 전체 길이에 대한 RANKL 억제 효과를 결정합니다. 이 분석은 그룹 간에 상당한 차이가 있는지 보여줍니다. 반복적으로 측정된 결과의 경우 그룹 간 각 결과의 예상 기울기 또는 변화율을 비교해야 합니다. 혼합 모델을 사용하면 매개변수 추정에 적절하게 통합하기 위해 각 남성의 기준선-1일 80-180일 반복 관찰 사이의 상관관계를 허용합니다. 기준선 및 180일에 측정된 모든 종점에 대해 쌍체 t-검정을 사용하여 그룹 간에 상당한 차이가 있는지 평가하고 각 그룹 내의 평균 변화가 0과 크게 다른지 여부를 결정합니다. 두 경우 모두 모델 가정을 충족하기 위해 필요에 따라 데이터가 변환됩니다. 그 후, 계절, BMI, 흡연, 금욕 기간, 사정에서 운동성 평가까지의 시간, 열 등과 같은 관련 교란변수와 함께 다중 회귀를 사용하여 동일한 분석을 수행하여 결과가 변경되는지 확인합니다. 측정할 수 없는 결과에 대해 1일, 80일 및 180일에 t-테스트 또는 기타 파라메트릭 테스트와 비교하여 Wilcoxon Mann-Whitney 테스트와 같은 비모수 테스트를 사용하여 그룹을 비교합니다. 이진법 결과의 경우 관련 교란 요인에 대한 조정과 함께 조건부 로지스틱 회귀 분석을 통해 두 그룹 간에 데이터를 비교할 것입니다(유의하게 p<0.05 관련되는 것으로 정의됨).
2. 하위 그룹으로 계층화 후 분석 피험자는 스크리닝 당일 평가된 BMI, 정액 품질, 혈청 RANKL, OPG, 칼슘, PTH, 오스테오칼신 또는 기타 골인자에 따라 그룹화됩니다. 하위 그룹 분석은 임상(BMI <25, 25-30, >30 등), 3분위수 또는 최고/최저 대 기준선에 남아 있는 것에 따라 적절한 그룹에서 정상적인 임상 관행 및 계층화에 따를 것입니다. 개입 후 모든 방문의 기준선 및 평균/중앙값과 함께 80, 120, 180일 방문의 평균/중간값 외에 기준선과 비교하여 각 시간에 대해 분석을 수행할 것입니다.