TNFSF11:n esto ja hedelmällisyys: tulevaisuuden tutkimus

NF-kB-ligandijärjestelmän (RANKL) reseptoriaktivaattoria pidetään tärkeänä luun homeostaasille. RANKL:ia on kolmessa isoformissa, ja kaikkien isoformien vaikutukset välittyvät spesifiseen reseptoriin sitoutumisen kautta (NF-KB:n (RANK) reseptoriaktivaattori). RANKL esiintyy pääasiassa transmembraanisena proteiinina ja signalointi on siksi riippuvainen solu-solu-vuorovaikutuksesta viereiseen soluun, joka ekspressoi RANK:ia, joka myöhemmin aktivoi NFKB:n ja säätelee solujen aktivaatiota säätelemällä solusykliä eli proliferaatiota, erilaistumista ja apoptoosia. RANKL-RANK-vuorovaikutusta modifioi osteoprotegeriini (OPG), joka on endogeeninen erittyvä proteiini, joka sitoutuu RANKL:iin ja estää sen signalointia.

RANK/RANKL laukaisee TRAF-välitteisten kinaasikaskadien verkoston, joka edistää osteoklastien erilaistumista. RANKL ekspressoituu osteoblastisoluissa ja sen reseptori, Rank, pre-osteoklastisissa soluissa. RANKL:n ilmentymistä stimuloivat monet tekijät, kuten IL-1, IL-6, IL-11, IL-17, TNF-α, D-vitamiini, Ca2+, lisäkilpirauhanen, glukokortikoidit, prostaglandiini E2 ja immunosuppressiiviset lääkkeet. TGF-α säätelee alaspäin. RANK/RANKL-vuorovaikutus indusoi erilaistumista ja monitumaisten kypsien osteoklastien muodostumista aiheuttaen luun resorptiota. Osteoblastit tuottavat myös kolmatta proteiiniagonistia, osteoprotegeriiniä (OPG), ja sen tiedetään vaikuttavan estävästi pre-osteoklastiseen erilaistumisprosessiin. Sitoutumalla RANKL:iin, joka tunnetaan myös nimellä osteoprotegeriinia sitova proteiini (OPGbp), OPG estää RANK/RANKL-vuorovaikutusta ja sitä seuraavaa osteoklastogeneesiä. OPG on siten erittäin tehokas resorptiota estävä aine. Se toimii myös houkutusreseptorina tuumorinekroositekijään liittyvälle apoptoosia indusoivalle ligandille (TRAIL) ja lisää solujen eloonjäämistä estämällä tämän ligandin apoptoottisia vaikutuksia. Se tosiasia, että OPG:n yli-ilmentyminen hiirissä johtaa vakavaan osteopetroosiin ja että OPG-tyhjät hiiret ovat osteoporoottisia, on osoitus OPG:n fysiologisesta merkityksestä. RANK:n tai RANKL:n puute aiheuttaa osteopetroosin hiirissä.

Siten RANK/RANKL-järjestelmä on elintärkeä luuta resorboivien solujen (osteoklastien) aktivoimiseksi. Luustossa luusyntetisoivat solut (osteoblastit) ilmentävät RANKL:ia, joka välittää signaalin RANK:lle epäkypsillä osteoklasteilla. Tämä saa aikaan niiden solujen lisääntymisen ja aktivoitumisen, jotka alkavat lisääntyä ja resorpoida luuta. OPG:tä tuottavat luun somaattiset solut ja tätä tuotantoa säätelevät sukupuolihormonit, TGF-B ja monet muut aineet. Nykyään Denosumabia, joka on ihmisen valmistama yhdistelmävasta-aine RANKL:ää vastaan, käytetään osteoporoosin hoitoon, koska se estää RANKL-signalointia ja aiheuttaa vähemmän luun resorptiota ihmisillä. RANKL-signalaatiolla on vain kaksi muuta tunnettua lisätoimintoa terveillä ihmisillä, joissa se osallistuu imetykseen ja immuunivasteeseen.

Tutkijoilla on tietoja, jotka osoittavat, että RANKL, RANK ja OPG ilmentyvät sekä RNA- että proteiinitasolla ihmisen kiveksessä. Sertoli-solut ekspressoivat RANKL:ää, kun taas sukusolut ekspressoivat RANK:ia ja peritubulaariset solut ekspressoivat OPG:tä. Normaalisti RANKL aktivoi NFKB:n ja tämän reitin aktivaatio miehen sukurauhasessa näyttää säätelevän sitä, lisääntyvätkö kivessolut vai käyvätkö ne läpi apoptoosin kiveksessä. Tutkijoiden in vitro-, ex vivo- ja in vivo -tiedot toiminnallisista malleista tukevat tätä ehdotusta, ja tämä reitti näyttää siksi olevan uusi sukusolujen lisääntymisen säätelijä.

Siemennesteen laadun heikkeneminen on merkittävä tekijä miesten hedelmättömyyteen. Siemennesteen laatu on epäsuora mitta siittiöiden kyvystä hedelmöityä. Miesten hedelmällisyyspotentiaalin arviointi arvioidaan siemennesteanalyysillä. Siemennesteanalyysi arvioi tiettyjä ominaisuuksia ja yleisimmät siittiöiden laadun arvioimiseksi mitatut muuttujat ovat siittiöiden määrä, liikkuvuus ja morfologia.

Miehille, joiden siemensyöksyssä ei ole siittiöitä, ei ole hoitoa tai edes lääkettä, joka voi lisätä siittiöiden määrää hedelmättömillä miehillä. Tästä syystä ehdotamme, että RANKL-vasta-aineita, kuten denosumabia, voidaan käyttää uutena hoitovaihtoehtona miesten hedelmättömyyteen. korostaa uutta indikaatiota denosumabihoidolle.

Siksi tutkijat testaavat tässä pienessä prospektiivisessa interventiotutkimuksessa, lisääkö denosumabin aiheuttama RANKL:n estäminen ihmisillä siittiöiden tuotantoa ja siemennesteen laatua.

Kutsumme 15 hedelmätöntä miestä yksityiskohtaiseen seulontaan varmistaaksemme odotetun 12 hedelmättömän miehen sisällyttämisen ja tutkimuksen päätökseen.

BIOSSTATISTINEN ANALYYSI

Kaikki analyysit suoritetaan hyvän kliinisen käytännön ohjeiden ja ensisijaisten analyysien mukaisesti hoitoaikeiden populaatiossa, johon kuuluivat kaikki potilaat, jotka saivat ensimmäisen lääkeannoksen päivänä 1. Analysoimme tiedot kahdella tavalla. Ensisijainen analyysi etenee perusarvojen mukaisesti verrattuna tulosmuuttujiin toimenpiteen jälkeen. Toissijainen analyysi perustuu miesten osittamiseen alaryhmäanalyysien mukaan suhteessa ennalta määritettyihin ensisijaisiin ja toissijaisiin päätepisteisiin.

Tietojen analysointi ja laatu Tämän protokollan ensisijaiset päätepisteet ovat siittiöiden tuotannon muutokset, jotka arvioidaan siittiöiden kokonaismäärällä, siittiöiden konsentraatiolla, jota seuraa progressiivisten ja liikkuvien siittiöiden lukumäärä, morfologisesti normaalit siittiöt, siittiöiden liikkuvuus, progressiivinen liikkuvuus ja morfologia, joita verrataan parillinen t-testi. Toissijaisia ​​päätepisteitä on useita, mutta alkuperäisessä tutkimuksessa keskitytään seuraavien toissijaisten päätepisteiden muutoksiin: siittiöiden DFI, FSH, inhibiini B, seerumin OPG, RANKL, OPG, D-vitamiini ja kalsiumin homeostaasi. Koehenkilöt, jotka lopettavat osallistumisen käyntipäivän 1 jälkeen mutta ennen käyntipäivää 180, otetaan mukaan data-analyysiin viimeiseen siemennesteen ja verinäytteen antamispäivään asti. Miehet, jotka luovuttavat siemennestenäytteitä vain satunnaisesti tai joilta puuttuu tietoja millä tahansa käynnillä, otetaan edelleen mukaan analyysiin. Miehet, jotka eivät täytä pöytäkirjan kriteerejä, suljetaan pois analyysistä. Miehiä, joilla on yli 38,5 astetta kuumetta, ei oteta mukaan analyyseihin 3 kuukauden kuluessa kuumejakson jälkeen. Siemennestenäytteitä, jotka on otettu alle 24 tunnin raittiusjaksolla tai joiden siemennesteen tilavuus on < 1,5 ml, ei oteta mukaan analyyseihin. Nämä arvot siirretään sitten eteenpäin analyyseja varten. Käytetään 5 %:n merkitsevyystasoa. Ensisijaisia ​​analyysejä varten lasketaan lisäksi Bonferronu-Holmin p-arvon korjaus. Toissijaisessa analyysissä ei käytetä monikoekorjausta. Sen sijaan tuloksista keskustellaan useiden testaustilanteiden valossa.

1. Analyysit lähtötilanteen ja eri aikapisteiden välillä Ensimmäinen askel on verrata muutoksia ensisijaisissa tuloksissa lähtötason ja eri aikapisteiden välillä. Spermatogeneesi kestää normaalisti jopa 70 päivää miehillä, ja siksi määritämme eron kaikkiin yksittäisiin aikapisteisiin ja laskemme päivien 80, 120 ja 180 keskiarvon ja vertaamme perusarvoihin määrittääksemme RANKL-eston vaikutuksen spermatogeneesin koko pituuteen. Tämä analyysi osoittaa, onko ryhmien välillä merkittäviä eroja. Toistuvasti mitattujen tulosten osalta tämä edellyttää kunkin tuloksen arvioitujen kaltevuuden tai muutosnopeuksien vertaamista ryhmien välillä. Sekamallit mahdollistavat toistuvien havaintojen välisen korrelaation lähtötilanteen vuorokauden 1 päivän 80 päivän 180 välillä jokaisesta miehestä, jotta se voidaan sisällyttää sopivasti parametrien arviointiin. Kaikkien lähtötilanteessa ja päivänä 180 mitattujen päätepisteiden osalta käytetään parillisia t-testejä sen arvioimiseksi, onko ryhmien välillä merkittävä ero, ja määrittää, eroaako kunkin ryhmän keskimääräinen muutos merkittävästi nollasta. Molemmissa tapauksissa tiedot muunnetaan tarpeen mukaan mallin oletusten täyttämiseksi. Myöhemmin sama analyysi suoritetaan käyttämällä moninkertaista regressiota asiaan liittyvien sekaannusten, kuten vuodenajan, BMI:n, tupakoinnin, pidättymisen keston, siemensyöksystä motiliteettiarviointiin, kuumeen jne. kanssa, jotta nähdään, muuttaako tämä tuloksia Mitattujen tulosten, joita ei voida mitata verrattuna t-testiin tai muihin parametrisiin testeihin päivänä 1, päivänä 80 ja päivänä 180, ryhmiä verrataan käyttämällä ei-parametrisia testejä, kuten Wilcoxon Mann-Whitney -testiä. Binaaritulokselle tietoja verrataan kahden ryhmän välillä ehdollisen logistiikkaregressioanalyysin avulla ja mukauttamalla asiaankuuluvia sekaannuksia (määritelty merkitsevästi p < 0,05 liittyväksi).
2. Analyysit alaryhmiin jakamisen jälkeen Kohteet ryhmitellään BMI:n, siemennesteen laadun, seerumin RANKL:n, OPG:n, kalsiumin, PTH:n, osteokalsiinin tai muiden seulontapäivänä arvioitujen luutekijöiden mukaan. Alaryhmäanalyysit tehdään normaalin kliinisen käytännön mukaisesti ja jaetaan asianmukaisiin ryhmiin kliinisen (BMI <25, 25-30, >30 jne.), kolmannen asteen tai korkeimman/matalimman ja lähtötilanteen mukaan. Analyysit suoritetaan jokaiselle aikapisteelle verrattuna lähtötilanteeseen 80., 120., 180. käyntipäivän keskiarvoon/mediaaniin lisäksi kaikkien hoidon jälkeisten käyntien lähtötasolla ja keskiarvolla/mediaanilla.