TNFSF11 抑制和生育力：一项前瞻性研究

NF-kB 配体 (RANKL) 系统的受体激活剂被认为对骨稳态很重要。 RANKL 以三种同种型存在，所有同种型的作用都是通过与特定受体（NF-KB 受体激活剂 (RANK)）结合来介导的。 RANKL 主要被发现为跨膜蛋白，因此信号转导依赖于细胞与表达 RANK 的邻近细胞的相互作用，该细胞随后激活 NFKB 并通过调节细胞周期（即增殖、分化和凋亡）来调节细胞活化。 RANKL-RANK 相互作用被骨保护素 (OPG) 修饰，骨保护素是一种内源性分泌蛋白，可结合 RANKL 并抑制其信号传导。

RANK/RANKL 触发 TRAF 介导的激酶级联网络，促进破骨细胞分化。 RANKL 在成骨细胞上表达，其受体 Rank 在前破骨细胞上表达。 RANKL 的表达受到多种因素的刺激，如 IL-1、IL-6、IL-11、IL-17、TNF-α、维生素 D、Ca2+、甲状旁腺、糖皮质激素、前列腺素 E2 和免疫抑制药物，并且是受 TGF-α 下调。 RANK/RANKL相互作用诱导多核成熟破骨细胞的分化和形成，引起骨吸收。 第三种蛋白质激动剂骨保护素 (OPG) 也由成骨细胞产生，并且已知对破骨细胞前分化过程发挥抑制作用。 通过与 RANKL（也称为骨保护素结合蛋白 (OPGbp)）结合，OPG 抑制 RANK/RANKL 相互作用和随后的破骨细胞生成。 因此，OPG 是一种非常有效的抗再吸收剂。 它还充当肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL) 的诱饵受体，并通过阻断该配体的凋亡作用来提高细胞存活率。 OPG 在小鼠中的过度表达导致严重的骨质硬化症和 OPG 无效小鼠骨质疏松的事实证明了 OPG 的生理重要性。 RANK 或 RANKL 的缺乏会诱发小鼠骨硬化症。

因此，RANK/RANKL 系统对于骨吸收细胞（破骨细胞）的激活至关重要。 在骨骼中，骨合成细胞（成骨细胞）表达 RANKL，它向未成熟破骨细胞上的 RANK 发出信号。 这会诱导它们开始增殖和吸收骨骼的细胞的增殖和激活。 OPG 由骨骼中的体细胞产生，这种产生受性激素、TGF-B 和各种其他物质的调节。 如今，狄诺塞麦是一种针对 RANKL 的人造重组抗体，可用于治疗骨质疏松症，因为它可抑制 RANKL 信号并导致人体骨吸收减少。 RANKL 信号在健康人类中只有两个其他已知的附加功能，即参与泌乳和免疫反应。

研究人员的数据显示，RANKL、RANK 和 OPG 在人类睾丸中的 RNA 和蛋白质水平均有表达。 Sertoli 细胞表达 RANKL，而生殖细胞表达 RANK，管周细胞表达 OPG。 通常情况下，RANKL 会激活 NFKB，男性性腺中该通路的激活似乎可以调节睾丸细胞是增殖还是在睾丸中发生凋亡。 研究人员来自功能模型的体外、离体和体内数据支持这一建议，因此该途径似乎是一种新的生殖细胞增殖调节剂。

精液质量下降是男性不育的主要因素。 精液质量是精子完成受精能力的间接指标。 男性生育能力的评估是通过精液分析来评估的。 精液分析评估某些特征，评估精子质量的最常见变量是：精子数量、活力和形态。

对于射精中没有精子的男性，目前还没有治疗方法，甚至没有可以增加不育男性精子数量的药物。因此，我们建议抗 RANKL 的抗体，如狄诺塞麦，可以作为男性不育症的一种新的治疗选择，这强调狄诺塞麦治疗的新适应症。

因此，研究人员将在这项小型前瞻性干预研究中测试狄诺塞麦对人类 RANKL 的抑制是否会增加精子产量和精液质量。

我们将邀请 15 名不育男性进行详细筛查，以确保纳入并完成预期的 12 名不育男性的研究

生物统计分析

所有分析都将根据良好临床实践指南和意向治疗人群的主要分析进行，其中包括在第 1 天接受第一剂药物的所有患者。 我们将以两种方式分析数据。 主要分析将根据基线值与干预后的结果变量进行比较来进行。 二次分析将基于根据与预定义的主要和次要终点相关的亚组分析对男性进行分层。

数据分析和质量 该协议的主要终点将是精子产量的变化，通过总精子数量、精子浓度，然后是进步和活动精子的数量、形态正常的精子、精子活力、进步活力和形态学来评估，这些将通过以下方式进行比较配对 t 检验。 存在多个次要终点，但初步调查的重点将放在以下次要终点的变化上：精子 DFI、FSH、抑制素 B、血清 OPG、RANKL、OPG、维生素 D 和钙稳态。 在访问第 1 天之后但访问第 180 天之前终止参与的受试者将被纳入数据分析，直至他们提供精液和血样的最后一天。 仅偶尔提供精液样本或在任何访问中都缺少数据的男性仍将包括在分析中。 不符合协议标准的男性将被排除在分析之外。 发烧超过 38.5 摄氏度的男性在发烧发作后最多 3 个月内将不包括在分析中。 禁欲期少于 24 小时或精液量 < 1.5 毫升的精液样本将不包括在分析中。 然后将这些值用于分析。 使用 5% 的显着性水平。 对于主要分析，额外计算 Bonferronu-Holm p 值校正。 对于二次分析，不使用多重检验校正。 取而代之的是根据多种测试情况讨论结果。

1. 基线与不同时间点之间的分析第一步是比较基线与不同时间点之间主要结果的变化。 男性的精子发生通常需要长达 70 天，因此我们将确定所有个体时间点的差异并计算第 80、120 和 180 天的平均值，并与基线值进行比较以确定 RANKL 抑制对整个精子发生的影响。 该分析将显示各组之间是否存在显着差异。 对于重复测量的结果，这将需要比较各组之间每个结果的估计斜率或变化率。 混合模型允许将每个人的重复观察基线-天 1-天 80-天 180 之间的相关性适当地纳入参数估计。 对于在基线和第 180 天测量的所有终点，将使用配对 t 检验来评估组之间是否存在显着差异，并确定每组内的平均变化是否与零有显着差异。 在这两种情况下，数据都将根据需要进行转换以满足模型假设。 之后，将使用多元回归与相关混杂因素（例如季节、BMI、吸烟、禁欲持续时间、从射精到活力评估的时间、发烧等）进行相同的分析，以查看这是否会改变结果对于无法测量的结果与第 1 天、第 80 天和第 180 天的 t 检验或其他参数检验相比，将使用非参数检验（例如 Wilcoxon Mann-Whitney 检验）对各组进行比较。 对于二元结果，将通过条件逻辑回归分析对两组数据进行比较，并调整相关混杂因素（定义为显着 p<0.05 相关）。
2. 分组后的分析 受试者将根据他们的 BMI、精液质量、血清 RANKL、OPG、钙、PTH、骨钙素或筛选当天评估的其他骨因子进行分组。 亚组分析将根据临床（BMI <25、25-30、>30 等）、三分位数或最高/最低与保持在基线时的适当组中的正常临床实践和分层进行。 除了访问第 80、120、180 天的平均值/中值与基线和干预后所有访问的平均值/中值之外，还将对每个时间点与基线进行比较分析。