IL-28B rs12979860 および rs4803217 遺伝子多型が miRNA の規制緩和に関連することによる HCV 関連肝細胞癌への影響

序章

肝細胞癌 (HCC) は、世界中の癌による死亡の 3 番目に多い原因です。 HCC 治療の改善にもかかわらず、再発率が高いため、HCC 患者の予後は依然として不良です。 HCC 発生の病因の理解が深まれば、初期段階での HCC の診断と治療のためのより効果的な結果の開発が容易になります。

現在、腫瘍の分子変化はゲノム規模で精査されており、遺伝子発現、エピジェネティックな変化、染色体異常、最近では次世代シーケンシングなど、さまざまな次元をカバーしています。 多数の分子マーカーが HCC の発症に関連しています。診療所で役立つ可能性があります。ただし、人種差が報告されており、これらをより徹底的に調べる必要があります。

HCC 症例の 51.5% が HCV 感染に起因すると推定されています。 その中で、IL28B遺伝子の多型について言及する必要があります。 rs12979860 C/T および rs4803217。 IL-28B 遺伝子は、IFN-λ1、IFN-λ2、および IFN-λ3 を含む III 型 IFN ファミリーに属するインターフェロン ラムダ 3 (IFN-λ3) をコードします。 膜貫通受容体と相互作用するIFN-λは、JAK-STATおよびMAPK経路の活性化によって媒介される強力な抗ウイルス応答を誘導します。 IL-28B 多型は、HCV 感染中の炎症プロセスの効率と、自然免疫および適応免疫によって HCV が逃れるために採用するメカニズムに関連しています。 興味深いことに、III 型 IFN は実験モデルで HBV と HCV の両方の複製を阻害することがわかっているため、ここ数年、多くの研究で IL-28B 多型と HCC および肝硬変 (LC) 発症のリスクとの関連性が評価されてきました。異なる集団で;ただし、結果は一貫性がなく、決定的ではありません。 これらの理由から、HCC 発生における IL28B 多型の影響を深く理解することが必須です。

興味深いことに、いくつかの多型は IL28B の 3' 非翻訳領域 (UTR) に位置しています。 rs 4803217 は、今日まで重要な転写後調節因子として認識されている miRNA の結合を妨害するようです。

実際、miRNA は、長さが 21 ～ 30 ヌクレオチドの小さな干渉性の非コード RNA であり、200 以上の mRNA の調節を促進することができ、ヒトの癌と広く関連しています。 ここ数年で、miRNA は、がんを含むいくつかの疾患の潜在的なバイオマーカーとしての関連性が高まっています。

特に、循環中で安定している細胞外 miRNA の発見は、HCC の新しい有用で侵襲性の低い診断マーカーの同定を目指して、多くの研究者を評価に駆り立てます。

目的

全体的な目標は、HCV 関連肝細胞癌に対する miRNA の規制緩和に関連する IL-28B rs12979860 および rs4803217 遺伝子多型の影響を調査することです。

特定の目的:

1. 慢性 C 型肝炎患者における IL 28B 多型と HCC のリスクとの関連を決定すること。
2. C 型慢性肝炎が HCC に進行する際に規制緩和された miRNA を明らかにするために、miRNA の幅広いパネルをスクリーニングする
3. 慢性 C 型肝炎患者における HCC の予測マーカーとして、IL 28B 多型と主要な規制緩和された miRNA との関連を特定する

研究アプローチと方法論

患者と方法:

忍耐：

この調査には、3 つのグループに分けられた 405 人の被験者が含まれます。

グループ 1。 このグループには、C 型慢性肝炎の患者が含まれます (番号 = 135) グループ 2。 このグループには、肝硬変 (F4) を伴う慢性 C 型肝炎 (番号 = 135) の患者が含まれます。

グループ3。 このグループには、HCV 関連の HCC の患者が含まれます (no. =135) これは、イメージング (コンピューター断層撮影 (CT) および超音波) によって検出された限局性病変の存在、および血清 AFP の上昇によって確認されます。

• サンプル サイズの計算の基礎は次のとおりです。

• アルファフェトプロテイン: ses 41-60% , sp 80-94%
• HCV感染患者におけるHCCの有病率: 5-10%
• 計算は、平均 87% のアルファ フェト プロテインの特異性に基づいています。

信頼度 90 および誤差範囲 5%、HCV 感染患者における HCC の有病率 7% に基づいて、平均 135 症例/グループの合計 405 症例が必要です。

方法:

1. 血清αフェトプロテインレベルは、非代償性肝硬変のすべての患者で定期的にテストされました。 AFP レベルは、HCC であることが証明された症例で一般的に上昇しましたが、レベルは 15 から 650 ng/ml の範囲でした。 HCC の診断は、4 フェーズ マルチディテクター コンピューター断層撮影 (CT) スキャンまたはダイナミック コントラスト増強磁気共鳴画像法 (MRI) によって確認されました。
2. HCV RNAの定量化。 血漿が得られ、Ｃｏｂａｓ ＡｍｐｌｉＰｒｅｐ／ＣＯＢＡＳ ＴａｑＭａｎ ＨＣＶ Ｔｅｓｔ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｂｒａｎｃｈｂｕｒｇ，（ＮＪ））を使用して、血漿のＲＴ－ＰＣＲによってＨＣＶ ＲＮＡが決定される。

3. IL28B 多型:

   SNP rs12979860 および 4803217 は、リアルタイム PCR による特定のプローブを使用した対立遺伝子識別によって全血で決定されます。

4. miRNAの定量化

   ｍｉＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ）を製造業者の指示に従って使用して、血清からＲＮＡを抽出する。

   RNA の純度は、RNA 濃度によって評価され、NanoDrop ND-1000 (Nanodrop、米国) によって定量化されます。

   cDNAは、miScript II Reverse Transcription Kits (Quiagen)によって取得されます。前増幅は、miScript PreAMP PCR Kits (Quiagen)を使用して実行されます。リアルタイムPCRアレイは、miScript miRNA PCRアレイとSYBR Green PCR Master Mix (Quiagen)を使用して実行されます。

5. 統計分析：

統計分析は、SPSS Statistics ソフトウェアを使用して実行されます。 P 値、0.05 は有意と見なされました。

ＩＬ２８Ｂ ＳＮＰの比較は、ｒｓ１２９７９８６０ＣＣおよびｒｓ１２９７９８６０ＣＴ／ＴＴ遺伝子型に従って患者を階層化することによって行われ、４８０３２１７分析ｍｉＲＮＡ ＰＣＲアレイは、Ｑｕｉａｇｅｎによって特別に供給された特定のデータ分析ソフトウェアによって行われる。