与 miRNA 失调相关的 IL-28B rs12979860 和 rs4803217 基因多态性对 HCV 相关肝细胞癌的影响

介绍

肝细胞癌 (HCC) 是全球癌症死亡的第三大原因。 尽管 HCC 治疗有所改善，但由于复发率高，HCC 患者的预后仍然很差。 更好地了解 HCC 发展的发病机制将有助于在早期阶段为 HCC 的诊断和治疗开发更有效的结果。

目前，正在全基因组范围内仔细研究肿瘤的分子变化，涵盖不同的维度，例如基因表达、表观遗传变化、染色体畸变，以及最近的下一代测序。 大量分子标志物与肝癌的发生发展有关。这可能对临床有用；然而，据报道存在种族差异，需要更彻底地研究这些差异。

据估计，51.5% 的 HCC 病例可归因于 HCV 感染。 其中，不得不提的是IL28B基因的多态性，例如 rs12979860 C/T 和 rs4803217。 IL-28B基因编码干扰素λ3（IFN-λ3），属于III型IFN家族，包括IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3。 IFN-λ 与跨膜受体相互作用可诱导由 JAK-STAT 和 MAPK 通路激活介导的有效抗病毒反应。 IL-28B 多态性与 HCV 感染期间炎症过程的效率以及 HCV 通过先天免疫和适应性免疫逃避的机制有关。 有趣的是，由于已发现 III 型干扰素在实验模型中抑制 HBV 和 HCV 复制，在过去几年中，许多研究评估了 IL-28B 多态性与 HCC 和肝硬化 (LC) 发展风险之间的关联在不同的人群中；但是，结果不一致且不确定。 由于这些原因，必须深入了解 IL28B 多态性对 HCC 发生的影响。

有趣的是，一些多态性位于 IL28B 的 3' 非翻译区 (UTR)，例如 rs 4803217，似乎干扰 miRNA 的结合，迄今为止被认为是重要的转录后调节因子。

事实上，miRNA 是一种小的干扰性非编码 RNA，长度为 21-30 个核苷酸，可以促进 200 多种 mRNA 的调节，并且与人类癌症广泛相关。 在过去的几年中，miRNA 作为包括癌症在内的多种疾病的潜在生物标志物获得了越来越大的相关性。

特别是，在循环中稳定的细胞外 miRNA 的发现，促使许多研究人员进行评估，旨在鉴定新的有用且侵入性较小的 HCC 诊断标志物。

目标

总体目标是研究与 miRNA 失调相关的 IL-28B rs12979860 和 rs4803217 基因多态性对 HCV 相关肝细胞癌的影响

具体的目标：

1. 确定 IL 28B 多态性与慢性丙型肝炎患者 HCC 风险的关联。
2. 筛选广泛的 miRNA 以发现在慢性丙型肝炎向 HCC 进展过程中失调的 miRNA
3. 确定 IL 28B 多态性与作为慢性丙型肝炎患者 HCC 预测标志物的主要失调 miRNA 之间的关联

研究方法和方法

患者和方法：

患者：

本研究将包括 405 名受试者，分为 3 组：

第 1 组。 该组将包括患有慢性丙型肝炎的患者（编号 =135）第 2 组。 该组将包括患有慢性丙型肝炎（编号 =135）并伴有肝硬化 (F4) 的患者。

第三组。 该组将包括患有 HCV 相关 HCC 的患者（编号 . =135) 这是通过成像（计算机断层扫描 (CT) 和超声）检测到的局灶性病变的存在以及升高的血清 AFP 来证实的。

• 样本量计算的基础如下：

• 甲胎蛋白：ses 41-60%，sp 80-94%
• HCV 感染患者中 HCC 的患病率：5-10%
• 计算基于平均 87% 的甲胎蛋白特异性

总共需要 405 个病例，平均 135 个病例/组，基于置信度 90 和误差幅度 5 %，HCV 感染患者中 HCC 的患病率 7 %

方法：

1. 对所有失代偿期肝硬化患者常规检测血清甲胎蛋白水平。 在被证实为 HCC 的病例中，AFP 水平普遍升高，但水平范围为 15 至 650 ng/ml。 通过 4 相多探测器计算机断层扫描 (CT) 扫描或动态对比增强磁共振成像 (MRI) 确认 HCC 的诊断。
2. HCV RNA 定量。 将获得血浆并使用 Cobas AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV 测试（Roche Diagnostics, Branchburg, (NJ)）通过血浆的 RT-PCR 确定 HCV RNA。

3. IL28B多态性：

   SNP rs12979860 和 4803217 将通过实时 PCR 使用特定探针通过等位基因鉴别在全血中确定。

4. miRNA 定量

   根据制造商的说明，使用 miRNeasy Mini Kit (Quiagen) 从血清中提取 RNA。

   RNA 纯度将通过 RNA 浓度进行评估，并通过 NanoDrop ND-1000（Nanodrop，美国）进行量化。

   cDNA 将通过 miScript II 逆转录试剂盒 (Quiagen) 获得。预扩增将使用 miScript PreAMP PCR 试剂盒 (Quiagen) 进行。实时 PCRarray 将使用 miScript miRNA PCR 阵列和 SYBR Green PCR Master Mix (Quiagen) 进行。

5. 统计分析：

将使用 SPSS Statistics 软件进行统计分析。 P 值，0.05 被认为是显着的。

IL28B SNP 比较将通过根据 rs12979860CC 和 rs12979860CT/TT 基因型对患者进行分层来完成，而 4803217 分析 miRNA PCR 阵列将通过 Quiagen 特别提供的特定数据分析软件来完成。