HCV 관련 간세포 암종에 대한 miRNA 규제 완화와 관련된 IL-28B rs12979860 및 rs4803217 유전자 다형성의 영향

소개

간세포 암종(HCC)은 전 세계적으로 암 사망의 세 번째 주요 원인입니다. HCC 치료법의 개선에도 불구하고 HCC 환자의 예후는 높은 재발률로 인해 여전히 좋지 않습니다. HCC 발달의 병인에 대한 향상된 이해는 초기 단계에서 HCC의 진단 및 치료를 위한 보다 효과적인 결과의 개발을 촉진할 것입니다.

현재 종양의 분자 변이는 유전자 발현, 후성유전학적 변화, 염색체 이상, 그리고 최근에는 차세대 시퀀싱과 같은 다양한 차원을 다루는 게놈 차원에서 면밀히 조사되고 있습니다. 많은 수의 분자 마커가 HCC의 발달과 관련이 있습니다. 그것은 클리닉에서 유용할 수 있습니다. 그러나 인종적 차이가 보고되었으며 이에 대한 보다 철저한 검토가 필요합니다.

HCC 사례의 51.5%가 HCV 감염에 기인할 수 있는 것으로 추정됩니다. 그 중 IL28B 유전자의 다형성을 언급해야 합니다. rs12979860 C/T 및 rs4803217. IL-28B 유전자는 IFN-λ1, IFN-λ2 및 IFN-λ3을 포함하는 III형 IFN 패밀리에 속하는 인터페론-람다 3(IFN-λ3)을 암호화한다. 막관통 수용체와 상호작용하는 IFN-λ는 JAK-STAT 및 MAPK 경로의 활성화에 의해 매개되는 강력한 항바이러스 반응을 유도합니다. IL-28B 다형성은 HCV 감염 동안 염증 과정의 효율성과 HCV가 선천적 적응 면역에 의해 탈출하기 위해 채택하는 메커니즘과 관련이 있습니다. 흥미롭게도 III형 IFN이 실험 모델에서 HBV와 HCV 복제를 모두 억제하는 것으로 밝혀졌기 때문에 지난 몇 년 동안 많은 연구에서 IL-28B 다형성과 HCC 및 간경화(LC) 발생 위험 사이의 연관성을 평가했습니다. 다른 인구에서; 그러나 결과는 일관되지 않고 결정적이지 않습니다. 이러한 이유로 HCC 발생에서 IL28B 다형성의 영향에 대한 깊은 이해가 필수적입니다.

흥미롭게도 IL28B의 3' 비번역 영역(UTR)에 위치한 일부 다형성, 예를 들어 rs 4803217은 현재까지 중요한 전사 후 조절자로 인식되고 있는 miRNA의 결합을 방해하는 것으로 보입니다.

실제로 miRNA는 길이가 21-30개 뉴클레오티드인 작은 방해 비암호화 RNA로, 200개 이상의 mRNA의 조절을 촉진할 수 있으며 인간 암과 광범위하게 연관되어 있습니다. 지난 몇 년 동안 miRNA는 암을 비롯한 여러 질병에 대한 잠재적인 바이오마커로서 점점 더 관련성이 높아졌습니다.

특히, 순환에서 안정한 세포외 miRNA의 발견은 HCC에도 유용하고 덜 침습적인 새로운 진단 마커를 식별하는 것을 목표로 하는 평가에 많은 연구자들을 이끌고 있습니다.

목표

전반적인 목표는 HCV 관련 간세포 암종에 대한 miRNA 조절 완화와 관련된 IL-28B rs12979860 및 rs4803217 유전자 다형성의 영향을 조사하는 것입니다.

구체적인 목표:

1. 만성 C형 간염 환자에서 IL 28B 다형성(들)과 HCC 위험의 연관성을 결정합니다.
2. 만성 C형 간염이 HCC로 진행되는 동안 규제 완화된 miRNA를 발견하기 위해 광범위한 miRNA 패널을 스크리닝합니다.
3. 만성 C형 간염 환자에서 HCC의 예측 마커로서 IL 28B 다형성(들)과 주요 탈조절된 miRNA 사이의 연관성을 확인하기 위해

연구 접근 및 방법론

환자 및 방법:

환자:

이 연구에는 3개 그룹으로 나누어진 405명의 피험자가 포함됩니다.

그룹 1. 이 그룹에는 만성 C형 간염(no. =135) 그룹 2 환자가 포함됩니다. 이 그룹에는 간경화증(F4)이 있는 만성 C형 간염(no. =135) 환자가 포함됩니다.

그룹3. 이 그룹에는 HCV 관련 HCC 환자(아니오. =135) 이것은 이미징(컴퓨터 단층촬영(CT) 및 초음파) 및 상승된 혈청 AFP에 의해 검출된 국소 병변의 존재에 의해 확인됩니다.

• 표본 크기 계산의 기준은 다음과 같습니다.

• 알파 태아 단백질: ses 41-60%, sp 80-94%
• HCV 감염 환자 중 HCC 유병률: 5-10%
• 계산은 평균 87%의 알파태아 단백질의 특이성을 기반으로 합니다.

총 405건, 평균 135건/군, 신뢰도 90, 오차범위 5% 기준, C형간염 환자의 간세포암종 유병률 7%

행동 양식:

1. 비대상성 간경변증이 있는 모든 환자에서 혈청 α 태아단백 수치를 일상적으로 검사했습니다. AFP 수치는 일반적으로 HCC로 판명된 경우에 상승했지만, 수치 범위는 15~650 ng/ml였습니다. 간세포암종의 진단은 4상 다중검출기 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캔 또는 동적 조영 강화 자기공명영상(MRI)으로 확인되었습니다.
2. HCV RNA 정량. Cobas AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV 테스트(Roche Diagnostics, Branchburg, (NJ))를 사용하여 혈장의 RT-PCR에 의해 혈장을 얻고 HCV RNA를 결정합니다.

3. IL28B 다형성:

   SNP rs12979860 및 4803217은 실시간 PCR에 의해 특정 프로브를 사용하여 대립유전자 변별에 의해 전혈에서 결정될 것입니다.

4. miRNA 정량화

   제조업체의 지침에 따라 miRNeasy Mini Kit(Quiagen)을 사용하여 혈청에서 RNA를 추출합니다.

   RNA 순도는 RNA 농도에 의해 평가되고 NanoDrop ND-1000(Nanodrop, 미국)에 의해 정량화됩니다.

   cDNA는 miScript II 역전사 키트(Quiagen)에서 얻습니다. 사전 증폭은 miScript PreAMP PCR 키트(Quiagen)를 사용하여 수행됩니다. Real Time PCRarray는 SYBR Green PCR Master Mix(Quiagen)와 함께 miScript miRNA PCR 어레이를 사용하여 수행됩니다.

5. 통계 분석:

통계 분석은 SPSS Statistics 소프트웨어를 사용하여 수행됩니다. P-값, 0.05는 유의한 것으로 간주되었습니다.

IL28B SNP 비교는 rs12979860CC 및 rs12979860CT/TT 유전자형에 따라 환자를 계층화하여 수행하고 4803217 분석 miRNA PCR 어레이는 Quiagen에서 특별히 공급한 특정 데이터 분석 소프트웨어로 수행합니다.