プロゲステロン受容体アイソフォーム A のレベルがアイソフォーム B よりも高い乳癌患者に対するミフェプリストン. (MIPRA)

仮説

PRは乳がんの増殖に関与しています。 抗プロゲスチン ミフェプリストン (MFP) は、PRA の高発現を伴う乳癌で抗腫瘍効果を発揮します。 研究者らは、PRB よりも PRA のレベルが高い乳癌は、抗プロゲスチン療法の恩恵を受けるという仮説を立てています。

プレシス

この研究の目的は、生検コアと生検の間の 14 日間にミフェプリストン (MFP) によるネオアジュバント治療のために、PR (50% 以上) を発現し、PRB と比較して PRA が 1.5 倍の原発腫瘍を有する 20 人の乳癌患者を選択することです。手術。 現在、一般的な PR アイソフォームに基づいて乳がん患者を選択する研究はありません。 抗プロゲスチンは効果がないか、過剰発現している PRB を刺激することさえあるため、これは非常に重要です。

バックグラウンド

乳がんは依然として女性の主な死因の 1 つです。 現在の内分泌治療は、エストロゲン受容体 (ER) を標的とするか、17-β-エストラジオール (E2) の合成を阻害することを目的としています。 実験的研究および人間の疫学から得られた新たな証拠は、乳がんの増殖におけるプロゲスチンの重要な役割を示しています。

両方の PR アイソフォームは、同じ遺伝子から転写されます。 PRB には 933 個のアミノ酸があり、PRA には最初の 164 個のアミノ酸がありません。 ノックアウト モデルを使用して実証されているように、それらは in vivo でさまざまな役割を果たします。

プロゲステロンアンタゴニストであるMFPは、PRBの存在下でアゴニストとしても作用する可能性があります。 このコンテキストでは、MFP にバインドされた PR は、コリプレッサーではなくコアクチベーターをリクルートします。 MFP は、抗グルココルチコイド効果も発揮する可能性があります。 抗黄体ホルモンとして、子宮成熟や子宮内胎児死亡などのさまざまな産科適応症に、1 日あたり 200 mg を超える用量で使用されています。 抗グルココルチコイドとして、うつ病やアルツハイマー病などのさまざまな精神障害に使用できる可能性があり、最近、FDA はクッシング病の治療に使用することを承認しました (1 日 300 mg)。

乳がん治療における抗黄体ホルモン

患者の抗黄体ホルモン療法を評価する最初の臨床試験では、3 次試験のために 22 人の患者が募集されました。 患者は、MFP 200 mg/日で 1 ～ 3 か月間治療されました。 3 か月の治療後、18% の反応率が得られました。 長期耐性は良好であった。 他の 3 つの研究が、5 番目の研究の未発表の結果とともにレビューされました。 MFP を使用した乳がん治療の臨床結果は他に発表されていません。

最近では、抗黄体ホルモンの評価のために 4 つの臨床試験が開始されました。 ClinicalTrials.gov 識別子: NCT01138553、ネオアジュバンシーでの MFP の試験は、募集が困難なため中止され、NCT00555919、ロナプリザンの試験である NCT00555919 は、予想される臨床反応が得られなかったため中止されました。 テラプリストンをテストする NCT01800422 とオナプリストンをテストする NCT02052128 の 2 つの他の研究が進行中です。

前臨床試験における抗黄体ホルモン

異なるPRアイソフォームを発現するマウス乳癌、および異なるPR比率を発現するように操作された実験的ヒト乳癌モデルを使用して、研究者は、PRBのレベルよりもPRAのレベルが高い腫瘍のみが抗プロゲスチン治療で退縮することを実証しました. さらに、PRB よりも PRA のレベルが高い乳癌サンプルは、ex vivo で MFP 治療に反応します。

研究デザイン

登録: 治験責任医師は、マンモグラフィおよび超音波検査により、a) 臨床的に乳がんと診断されており (生検で確認)、b) このがんの治療に手術が推奨されている患者を募集します。 患者は、ガス博士、および/またはリグオリ博士、またはポーラ・マルティネス・バスケス博士からインタビューを受け、研究に同意します。 元の IC は患者の CRF に保存され、コピーはメインのスタディ ファイルに保存されます。

匿名化と一意の患者識別子の生成: 研究サンプルは識別コードで匿名化されます。 ガス博士とラナリ博士だけがコードにアクセスできます。

生検: IC に署名し、患者が臨床試験の候補者である可能性があることを評価した後、患者はエコーガイドの下で生検を受けます。 3 つの針のコアは、a) 最終診断を行う、b) ウエスタンブロット (WB) による PRA/PRB アイソフォーム比の測定、c) 免疫組織化学 (IHC) による ER および PR の測定、およびバイオマーカー染色用のパラフィンブロックの保存のために取得されます。 d) 腫瘍トランスクリプトームを実行します。 生検コアは、分子研究のために-80°Cで急速冷凍され、他のものは診断決定とPR IHCのために通常の病院ガイドラインに従って10%緩衝ホルムアルデヒドで固定されます。

血液：生検の同日に採取し（標準的な病院の手順で40ml）、通常のアプローチに加えてさまざまな研究を行うために保存します：a）MFP測定b）循環DNA /マイクロRNA /腫瘍細胞の精製。 この手順は、手術の日に繰り返されます。

診断: 生検の 72 時間後に、診断、PR WB、および IHC PR 値が利用可能になります。 患者が適格である場合、彼女は 14 日間の治療の準備ができています。 すべての研究は CRF に記録されます。

治療: MFP 200 mg の一般的な錠剤を 1 日 1 回、14 日間経口投与。 MFP は、Pharma web Canada の国際薬局から輸入されます。 賞味期限は2018年7月です。 すべての医薬品は、FDA 承認施設 (help@pharmawebcanada.com) で製造されています。 99本×3ケースの購入となります。 患者がプロトコールに参加すると、14 錠が自宅で患者に薬を投与する担当者に渡されます (アルゼンチン当局からの要求)。フォームは、患者、作業者、ガス博士によって署名され、フォーム患者のCRFに保管されています。

クリニック管理: 治療開始から 1 週間後、患者はクリニック管理のために病院に戻ります。 注: 募集期間が延長されたため、有効期限が 2019 年 10 月の新しいミフェプリストン錠剤を購入しました。

禁忌：

• MFP過敏症。
• 慢性腎不全。
• 喘息。

副作用: 重度の副作用は予想されません。 軽度の影響には、吐き気、嘔吐、低レベルでの無気力などがあります。 プロトコルをやめた患者は、プロトコル内の患者として扱われます。

禁忌療法：女性が他の薬を服用している場合、主治医は可能性のある相互作用をケースバイケースで評価します. 必要に応じて、患者はプロトコルから除外されます。 患者は、治験の一環として投与されたものとは異なる投薬を受ける必要が生じた場合、主治医に通知するように指示されます。

手術前: 治療前後の画像を比較するための新しいマンモグラムとエコグラフィー (違いは予想されません)。

手術：すべての乳癌患者のための通常の病院のガイドラインに基づいています。 治療開始後15日目に実施されます。 免疫組織化学染色（ホルマリン固定）のために組織を収集し、ゲノム/プロテオミクス研究のために-80℃で凍結保存します。 前述のように血液も採取されます。

技術手順

サンプル輸送: 匿名化された凍結サンプルは、特別な輸送会社 (Transportes Ambientales S.A) を使用して、ドライアイスでの WB 研究のために IBYME に送信されます。 IBYME では、セキュリティ担当者が到着を記録し、LCH ラボに移送されます。

PR WB: 核抽出物は、前述のように実行および処理されます。 T47D 細胞は陽性対照として使用されます。 パオラ ロハスが PRA/PRB 比率の決定を担当します。 手順は記録されます。 結果は Dr.Liguori と Dr. Gass に送信され、そのコピーが CRF に保管されます。

PR IHC: 5 ミクロンのパラフィン包埋コア組織を、FDA 承認の抗体を使用して標準的な PR IHC アッセイ用に処理し、前述のように定量化します。 2 人の病理学者 (Dr. Gonzalez と Dr. May、Dr. Molinolo が監督) が IHC 染色を定量化し、採点します。 病理学者は、生検の 72 時間後に PR スコアを Liguori 博士に通知し、Liguori 博士は患者の CRF に記録を含めます。

患者の組み入れの決定: Liguori 博士は、WB 情報と PR IHC 情報を収集する責任を負い、ガス博士は、患者がすべての組み入れ基準に一致するため、患者がプロトコルに参加する可能性があることに同意する必要があります。 署名されたフォームは、患者の CRF に含まれます。

バイオマーカーの評価: 一次および二次エンドポイントのすべてのアッセイは、患者募集の終了後に分析されます。 核 Ki-67 染色は、Goldhirsch et al., 2013 に従って評価され、他のバイオマーカーは、募集されたすべての患者の生検と手術のスコアを比較する研究の最後に評価されます。 ホルモン受容体および Ki-67 以外のバイオマーカーについては、細胞質、核、および膜の染色も考慮されます。 2 人の病理学者の間で Ki-67 スコアの差が 10% を超える腫瘍は、完全な合意が得られるまで再評価されます。 差が 10% 未満の場合は、平均スコアが考慮されます。 陽性反応が見られた場合 (生検と手術の間でバイオマーカー発現が 30% 変化)、研究者は利用可能なゲノムプラットフォームを使用してサンプルの分子分析を開始します。

統計: 記述統計は、被験者のベースライン特性、治療管理/コンプライアンスなどを要約するために使用されます。 必要に応じて、データもグラフで表示されます。 登録されたすべての科目の会計が要約されます。 研究を中止した被験者の数と中止の理由を表にまとめます。 適格基準を満たさなかった被験者について説明します。 被験者の年齢、性別、人種、身長、体重、ECOG パフォーマンス ステータス、悪性腫瘍の病歴、病歴などの人口統計学的およびベースラインの特徴が要約されます。 バイオマーカー発現の変化を比較するために、ウィルコクソン符号順位検定が使用されます。

含まれる患者の数: 含まれる患者の数を計算するために、研究者はタイプ 1 エラーを修正しました: 0.05 およびタイプ 2: 0.10、検出力 0.8。 Ki-67またはアポトーシス指数の生検と手術の間に違いは記録されるべきではないと想定され、Ki-67の30％の減少は肯定的な結果と見なされました。 未発表のデータは、患者の 37.3% が 1.5 を超える PRA/PRB を持っていることを示唆しており、適切な数を満たすために約 80 の生検が WB によって研究されることを示しています。

保険: Prudencia Seguros、# 00056924、病院が雇用

規制ファイルに含める文書:

1. アルゼンチン保健省規則 Res 1480 ANMAT
2. ANMAT に提示されたプロトコルの最後のバージョン (バージョン 3; 2015 年 3 月 16 日)
3. Clinicaltrials.gov によって承認されたバージョン
4. ICの型式
5. 参加者履歴書
6. IRB の承認と修正
7. 医薬品の輸入を受け入れる ANMAT フォーム
8. 前述の投薬管理に関連するすべてのフォーム
9. IRBs の認証に関連する文書
10. 装置のキャリブレーション方法を含む、WB および IHC に関するプロトコル
11. すべての診療行為に関するSOP

ファイル全体は、機関のIRBまたはMINCYT、CONICET、または関係する可能性のあるその他の当局による検査に利用できます。 ガス博士は、評価委員会から要求されたすべてのデータを提供する責任があります。

注記: M. Liguori 博士は、2018 年 8 月以降、患者の担当ではなくなりました。 Hugo Gass 博士は、患者募集、生検、クリニック評価を担当しています。 病理学者のマリア・メイ博士とペドロ・ゴンザレス博士は、もはやこの研究には関与していません。 彼らはユーニス・スペングラーとシルビア・イネス・ヴァンズーリに取って代わられた。