Mifepristoni rintasyöpäpotilaille, joilla on korkeampi progesteronireseptorin isoformi A kuin isoformi B. (MIPRA)

Hypoteesi

PR osallistuu rintasyövän kasvuun. Antiprogestiinimifepristonilla (MFP) on kasvaimia estäviä vaikutuksia rintasyöpään, jossa PRA:n ilmentyminen on korkea. Tutkijat olettavat, että rintasyövät, joissa on korkeampi PRA-taso kuin PRB, hyötyvät antiprogestiinihoidosta.

Precis

Tutkimuksen tavoitteena on valita 20 rintasyöpäpotilasta, joiden primaariset kasvaimet ilmentävät PR:a (50 % tai enemmän) ja 1,5-kertaista PRA:ta PRB:hen verrattuna, neoadjuvanttihoitoon mifepristonilla (MFP) 14 päivän ajan biopsian ytimen ja leikkaus. Tällä hetkellä ei ole olemassa tutkimuksia, joissa valittaisiin rintasyöpäpotilaita vallitsevan PR-isoformin mukaan. Tämä on erittäin tärkeää, koska antiprogestiineilla ei ehkä ole vaikutusta tai ne saattavat jopa stimuloida niitä, jotka yli-ilmentävät PRB:tä.

Tausta

Rintasyöpä on edelleen yksi yleisimmistä naisten kuolinsyistä. Nykyiset endokriiniset hoidot tähtäävät joko estrogeenireseptoreihin (ER) tai 17-β-estradiolin (E2) synteesin estämiseen. Kokeellisista tutkimuksista ja ihmisen epidemiologiasta saadut uudet todisteet osoittavat progestiinien tärkeän roolin rintasyövän kasvussa.

Molemmat PR-isomuodot transkriptoidaan samasta geenistä. PRB:ssä on 933 aminohappoa, kun taas PRA:sta puuttuu ensimmäiset 164 aminohappoa. Heillä on erilaisia ​​rooleja in vivo, kuten on osoitettu knock out -malleilla.

MFP, progesteroniantagonisti, voi myös toimia agonistina PRB:n läsnä ollessa. Tässä yhteydessä MFP-sidottu PR värvää koaktivaattoreita ennemmin kuin ydinpressoreita. MFP:llä voi myös olla antiglukokortikoidivaikutuksia. Antiprogestiinina sitä on käytetty erilaisiin synnytysaiheisiin, kuten kohdun kypsymiseen ja kohdunsisäiseen sikiökuolemaan, yli 200 mg/vrk annoksina. Antiglukokortikoidina sitä voidaan käyttää erilaisissa psykiatrisissa häiriöissä, mukaan lukien masennus ja Alzheimerin tauti, ja äskettäin FDA hyväksyi sen käytön Cushingin taudin hoitoon (300 mg päivässä).

Antiprogestiinit rintasyövän hoidossa

Ensimmäiseen kliiniseen tutkimukseen, jossa arvioitiin potilaiden antiprogestiinihoitoa, valittiin 22 potilasta kolmannen linjan tutkimukseen. Potilaita hoidettiin MFP:llä, 200 mg/vrk, 1-3 kuukauden ajan. Kolmen kuukauden hoidon jälkeen vasteprosentti oli 18 %. Pitkän aikavälin sietokyky oli hyvä. Kolme muuta tutkimusta tarkasteltiin yhdessä viidennen tutkimuksen julkaisemattomien tulosten kanssa. Muita julkaistuja kliinisiä tuloksia rintasyövän hoidosta MFP:llä ei ole.

Hiljattain on käynnistetty neljä kliinistä tutkimusta antiprogestiinien arvioimiseksi. The ClinicalTrials.gov Tunniste: NCT01138553, MFP:n testaus neoadjuvantissa keskeytettiin rekrytointivaikeuksien vuoksi ja lonaprisaania testaava NCT00555919, Schering, keskeytettiin odotetun kliinisen vasteen puuttumisen vuoksi. Kaksi muuta tutkimusta on meneillään, NCT01800422 testaa telapristonia ja NCT02052128 onapristonia.

Antiprogestiinit prekliinisissä tutkimuksissa

Käyttämällä hiiren rintasyöpää, jotka ekspressoivat erilaisia ​​PR-isoformeja, ja kokeellisia ihmisen rintasyöpämalleja, joita on manipuloitu ekspressoimaan erilaisia ​​PR-suhteita, tutkijat ovat osoittaneet, että vain kasvaimet, joiden PRA-tasot ovat korkeammat kuin PRB:n, taantuvat antiprogestiinihoidolla. Lisäksi rintasyöpänäytteet, joissa on korkeammat PRA-tasot kuin PRB, reagoivat ex vivo MFP-hoitoon.

Opintojen suunnittelu

Rekisteröityminen: Tutkijat rekrytoivat potilaita, joilla on mammografiset ja kaikututkimukset, joilla a) on diagnosoitu rintasyöpä kliinisesti (vahvistettava biopsialla) ja b) leikkausta on suositeltu tämän syövän hoitamiseksi. Tohtori Gass ja/tai tohtori Liguori tai tohtori Paula Martínez-Vazquez haastattelevat potilaat, ja he suostuvat tutkimukseen. Alkuperäinen IC säilytetään potilaan CRF:ssä ja kopio päätutkimustiedostossa.

Anonymisointi ja yksilöllisen potilastunnisteen luominen: Tutkimusnäytteet anonymisoidaan tunnistekoodilla. Vain tohtori Gassilla ja tohtori Lanarilla on pääsy koodeihin.

Biopsiat: Kun potilas on allekirjoittanut IC-todistuksen ja arvioinut, että potilas on mahdollisesti ehdokas kliiniseen tutkimukseen, potilaalle otetaan biopsia kaikukuvauksen mukaisesti. Otetaan kolme neulansydäntä a) lopullisen diagnoosin tekemiseksi, b) PRA/PRB-isoformisuhteen mittaamiseksi Western blotilla (WB), c) ER:n ja PR:n mittaamiseksi immunohistokemialla (IHC) ja parafiiniblokin säilyttämiseksi biomarkkerivärjäystä varten ja d) suorittaa kasvaimen transkriptio. Biopsian ydin pakastetaan -80 °C:seen molekyylitutkimuksia varten ja muut kiinnitetään 10 % puskuroituun formaldehydiin diagnoosin määritystä ja PR IHC:tä varten sairaalan rutiiniohjeiden mukaisesti.

Veri: Kerätään samana päivänä biopsiasta (40 ml tavanomaisilla sairaalamenetelmillä) ja varastoidaan erilaisten tutkimusten tekemiseksi rutiininomaisen lähestymistavan lisäksi: a) MFP-mittaus b) puhdistaa kiertävät DNA:t/mikroRNA:t/kasvainsolut. Tämä toimenpide toistetaan leikkauspäivänä.

Diagnoosi: Seitsemänkymmentäkaksi tuntia biopsian jälkeen diagnoosi, PR WB ja IHC PR-arvo ovat saatavilla. Jos potilas täyttää vaatimukset, hän on valmis 14 päivän hoitoon. Kaikki tutkimukset kirjataan CRF:ään.

Hoito: Geneeriset MFP-tabletit 200 mg p.o kerran päivässä 14 päivän ajan. MFP tuodaan Pharma web Canadan kansainvälisistä apteekeista. Viimeinen voimassaolopäivä on heinäkuu 2018. Kaikki lääkkeet valmistetaan FDA:n hyväksymissä tiloissa (help@pharmawebcanada.com). Ostetaan kolme 99 kappaleen koteloa. Kun potilas tulee protokollaan, 14 pilleriä annetaan henkilökunnalle, joka vastaa lääkkeen antamisesta potilaalle hänen kotonaan (Argentiinan viranomaisten vaatimus). Lomakkeen allekirjoittavat potilas, työntekijä ja tohtori Gass ja lomake. pidetään potilaan CRF:ssä.

Kliinisen kontrolli: Viikon kuluttua hoidon aloittamisesta potilas palaa sairaalaan klinikkatarkastukseen. Huomautus: Pidentyneen rekrytoinnin vuoksi ostettiin uusia mifepristone-pillereitä, joiden viimeinen käyttöpäivä on lokakuu 2019.

Vasta-aiheet:

• MFP-yliherkkyys.
• Krooninen munuaisten vajaatoiminta.
• Astma.

Haittavaikutukset: Vakavia sivuvaikutuksia ei odoteta. Lieviä vaikutuksia voivat olla: pahoinvointi, oksentelu, alhainen letargia. Potilaita, jotka lopettavat protokollan, kohdellaan protokollan sisällä olevina potilaina.

Vasta-aiheiset hoidot: Jos naiset käyttävät muita lääkkeitä, hoitavat lääkärit arvioivat mahdolliset yhteisvaikutukset tapauskohtaisesti. Potilas suljetaan tarvittaessa pois protokollasta. Potilaita kehotetaan ilmoittamaan hoitavalle lääkärille, jos ilmenee tarve määrätä muuhun kuin tutkimuksessa annetusta lääkkeestä.

Ennen leikkausta: Uusi mammografia ja ekografia kuvien vertaamiseksi ennen hoitoa ja sen jälkeen (eroja ei odoteta).

Leikkaus: Sairaalan rutiiniohjeiden mukaisesti kaikille rintasyöpäpotilaille. Se suoritetaan 15. päivänä hoidon aloittamisen jälkeen. Kudos kerätään immunohistokemiallista värjäystä varten (formaliinikiinnitetty) ja säilytetään pakastettuna -80 °C:ssa genomi-/proteomisia tutkimuksia varten. Myös verta kerätään kuten edellä mainittiin.

Tekniset menettelyt

Näytteen kuljetus: Anonymisoidut pakastetut näytteet lähetetään IBYMEen WB-tutkimuksia varten kuivajäässä käyttämällä erityistä kuljetusyritystä (Transportes Ambientales S.A.). IBYME:ssä turvahenkilöstö kirjaa saapumisen ja kuljetetaan sitten LCH-laboratorioon.

PR WB: Ydinuutteet suoritetaan ja käsitellään edellä kuvatulla tavalla. T47D-soluja käytetään positiivisena kontrollina. Paola Rojas vastaa PRA/PRB-suhteen määrittämisestä. Toimenpiteet kirjataan. Tulokset lähetetään Dr.Liguorille ja Dr. Gassille, ja niistä säilytetään kopio CRF:ssä.

PR IHC: Viiden mikronin parafiiniin upotetut ydinkudokset käsitellään standardeja PR IHC-määrityksiä varten käyttämällä FDA:n hyväksymiä vasta-aineita ja kvantifioidaan edellä kuvatulla tavalla. Kaksi patologia (Dr. Gonzalez ja Dr. May, tohtori Molinolo valvoo) kvantifioivat ja pisteyttävät IHC-värjäyksen. Patologit ilmoittavat PR-pisteet tohtori Liguorille 72 tuntia biopsian jälkeen, joka sisällyttää tiedot potilaan CRF:ään.

Päätös potilaan sisällyttämisestä: Tri Liguori vastaa WB-tietojen ja PR IHC -tietojen keräämisestä ja tohtori Gassin on hyväksyttävä, että potilas voi osallistua protokollaan, koska hän täyttää kaikki sisällyttämiskriteerit. Allekirjoitettu lomake toimitetaan potilaan CRF:ssä.

Biomarkkerin arviointi: Kaikki primaaristen ja toissijaisten päätepisteiden määritykset analysoidaan potilasrekrytoinnin jälkeen. Tuma Ki-67-värjäys arvioidaan Goldhirsch et al.:n, 2013, mukaan, ja muut biomarkkerit arvioidaan tutkimuksen lopussa vertaamalla kaikkien värvättyjen potilaiden biopsia- ja leikkauspisteitä. Sytoplasma-, tuma- ja kalvovärjäyksiä harkitaan myös muille biomarkkereille kuin hormonireseptoreille ja Ki-67:lle. Kasvaimet, joiden Ki-67-pisteytysero on suurempi kuin 10 % kahden patologin välillä, arvioidaan uudelleen, kunnes saavutetaan täydellinen yksimielisyys. Jos erot ovat alle 10 %, keskimääräinen pistemäärä otetaan huomioon. Jos havaitaan positiivinen vaste (30 % muutos biomarkkerin ilmentymisessä biopsian ja leikkauksen välillä), tutkijat aloittavat näytteiden molekyylianalyysin käyttämällä saatavilla olevia genomialustoja.

Tilastot: Kuvaavia tilastoja käytetään tekemään yhteenveto aiheen perusominaisuuksista, hoidon antamisesta/yhteensopivuudesta jne. Tiedot näytetään tarvittaessa myös graafisesti. Kirjanpito kaikista ilmoittautuneista aiheista tehdään yhteenveto. Tutkimuksesta keskeyttäneiden koehenkilöiden määrä ja keskeyttämisen syyt esitetään taulukossa. Koehenkilöt, jotka eivät täytä kelpoisuusehtoja, kuvataan. Demografiset ja perustiedot, kuten kohteen ikä, sukupuoli, rotu, pituus, paino, ECOG-suorituskyky, pahanlaatuisuushistoria ja sairaushistoria, esitetään yhteenveto. Wilcoxon signed rank testiä käytetään vertailemaan muutoksia biomarkkerin ilmentymisessä.

Mukaan otettavien potilaiden lukumäärä: Mukaan otettavien potilaiden lukumäärän laskemiseksi tutkijat korjasivat tyypin 1 virheen: 0,05 ja tyypin 2: 0,10, tehon 0,8. Oletettiin, että biopsian ja leikkauksen välillä ei pitäisi rekisteröidä eroja Ki-67:n tai apoptoottisten indeksien välillä ilman hoitoa, ja Ki-67:n 30 %:n laskua pidettiin positiivisena tuloksena. Julkaisemattomat tiedot viittaavat siihen, että 37,3 prosentilla potilaista PRA/PRB on yli 1,5, mikä osoittaa, että WB tutkii noin 80 biopsiaa oikean määrän saavuttamiseksi.

Vakuutus: Prudencia Seguros, # 00056924, sairaalan vuokraama

Sääntelytiedostoon sisällytettävät asiakirjat:

1. Argentiinan terveysministeriön asetus Res 1480 ANMAT
2. ANMATille esitellyn pöytäkirjan viimeisin versio (versio 3; 16. maaliskuuta 2015)
3. Clinicaltrials.gov:n hyväksymät versiot
4. IC:n malli
5. Osallistujien CV
6. IRB:n hyväksynnät ja muutokset
7. ANMAT-lomake, jolla hyväksytään lääkkeiden maahantuonti
8. Kaikki edellä mainitut lääkkeen antamiseen liittyvät muodot
9. IRB:iden sertifiointiin liittyvät asiakirjat
10. WB:tä ja IHC:tä koskevat pöytäkirjat, mukaan lukien laitteiden kalibrointimenetelmät
11. SOP liittyy kaikkeen kliiniseen käytäntöön

Koko tiedosto on Institutionaalisen IRB:n tai MINCYT:n, CONICETin tai muiden asianosaisten viranomaisten saatavilla tarkastettavaksi. Tri. Gass on vastuussa kaikkien arviointikomiteoiden pyytämien tietojen toimittamisesta.

Huomautuksia: Tri M. Liguori ei ole enää hoitanut potilaita elokuusta 2018 lähtien. Tohtori Hugo Gass vastaa potilaiden rekrytoinnista, biopsioista ja klinikan arvioinnista. Patologit tohtori Marìa May ja tohtori Pedro Gonzalez eivät ole enää mukana tutkimuksessa. Heidän tilalle tuli Eunice Spengler ja Silvia Ines Vanzulli.