治療を受けていない慢性 C 型肝炎患者における B 型肝炎ワクチンに対するロバストな抗体とサイトカイン応答：中国における非盲検対照試験

研究デザインと参加者 この研究は、中国山東省の 3 つの郡 (玉城、新台、東昌府) で実施されました。 慢性HCV感染の可能性のある患者は、病院の医療記録を確認するか、村の医師に問い合わせることによって募集されました。 健康な個人は、同じ郡で HCV 感染の可能性のある患者の 3 ～ 5 回によって無作為に選択されました。 アンケート調査を実施し、同様に潜在的な患者および健常者ごとに血液サンプルを採取しました。

アンケート調査参加者のベースライン情報を収集するために、アンケート調査を実施しました。これには、人口統計情報 (年齢、性別、身長、体重)、病歴 (アレルギー、慢性 C 型肝炎の診断と治療、ワクチン接種、発熱、感染症) が含まれます。他の急性疾患）、および行動状態（喫煙、飲酒、妊娠および授乳）。

B 型肝炎ワクチンの接種とフォローアップ Saccharomyces Cerevisiae で組換え DNA 技術によって作成された B 型肝炎ワクチン (1 回の投与につき 20 μg HBsAg/1.0 ml、Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong Province, China) が 3 回接種されました。三角筋領域のすべての参加者に、それぞれ0、1、および6か月に筋肉内投与しました。 参加者からの血液サンプルは、1 回目と 3 回目のワクチン接種の 1 か月後に採取されました。

研究室でのアッセイと身体検査 スクリーニング検査と身体検査血清ビリルビン、血清アルブミン、プロトロンビン時間、血漿 ALT およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ (AST) が HCV 群で検出されました。 HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、および抗HBcは、アボット化学発光微粒子免疫アッセイ（CMIA）（アボットアイルランド診断部門、スライゴ、アイルランド）によってアッセイされました。 抗ＨＣＶは、市販のキット（Ｉｎｔｅｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＩＮＣ、厦門、中国）を用いたＥＬＩＳＡによって測定した。 ＨＣＶ ＲＮＡは、市販のキット（ＱＩＡＧＥＮ、深圳、中国）を用いた定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。 血清ビリルビン、アルブミン、プロトロンビン時間、血漿 ALT および AST は、標準的な試薬および方法を使用して測定されました。 疾患の活動性を評価するために、HCV 感染の各患者は、問診、身体検査、超音波検査などの臨床検査を受けました。

ワクチン接種後の抗 HBs アッセイ 抗 HBs は、CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ireland) を使用して、ワクチン接種の 1 回目と 3 回目の投与の 1 か月後に検出されました。 血清学的な HBV マーカーはありませんが、ワクチン接種の初回投与から 1 か月後に抗 HBs が 100 mIU/ml 以上の場合、被験者は HBV 感染または B 型肝炎ワクチン接種の既往があると定義されました。

CMI アッセイ 1 回目のワクチン接種の前と 3 回目のワクチン接種の 1 か月後、HCV 群から 43 人の被験者と健康な対照群から 37 人の被験者がランダムに選択され、末梢血単核細胞 (PBMC) が分離され、インターフェロンを含む CMI 機能がそれぞれテストされました。 -γ (IFN-γ)、インターロイキン-2 (IL-2)、インターロイキン-4 (IL-4)、インターロイキン-5 (IL-5)、およびインターロイキン-6 (IL-6)。 S28-39 ポリペプチド、MHC クラス I ポリペプチド、MHC クラス II ポリペプチド、および HBsAg は、それぞれ IFN-γ の細胞免疫刺激剤として使用されました。 B型肝炎ウイルス表面抗原は、IL-2、IL-4、IL-5、およびIL-6の細胞免疫刺激剤として使用されました。 S28-39ポリペプチド、MHCクラスIポリペプチド混合物およびMHCクラスIIポリペプチド混合物は、BO MAI JIE Technology Co. LTD.で合成されました。 （中国、北京）。 HBsAg は、Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. から提供されました。 （深セン、中国）。

EDTA 抗凝固処理した血液から分離した PBMC を 2 × 106 細胞 /mL の濃度に調整しました。 100 μL 2 × 106 細胞/mL PBMC をプレコート PVDF 96 ウェルプレートに加え、100 μL HBsAg S28-39 ペプチド (IPQSLDSWWTSL、最終濃度: 10 μg/mL)、100 μL MHC クラス I ポリペプチド混合物、100 μL MHC クラス II ポリペプチド混合物または各ウェルに 100 μL HBsAg (80 μg/mL)。 IL-2、IL-4、IL-5、および IL-6 に関しては、各ウェルに 100 μL 2 × 106 細胞 /mL PBMC および 100 μL HBsAg (80 μg/mL) をプレートに注入しました。 次に、それらを 37 °C、5% CO2 および加湿インキュベーターで 20 時間 (IFN-γ、IL-2) または 40 時間 (IL-4、IL-5 および IL-6) インキュベートしました。 インキュベーション後、Ｒ＆Ｄ ＥＬＩＳＰＯＴ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）の取扱説明書に従ってプレートを操作した。 スポット形成細胞 (SFC) は、ImmunoSpotTM システム (Cellular Technology Ltd.) で計数されました。

安全性評価 参加者には、ワクチン接種後 7 日間の注射部位での要請された局所反応（痛み、硬結、紅斑、浮腫、そう痒症）、要請された全身反応（発熱、頭痛、疲労、咳）の発生と重症度を記録するための日記カードが提供されました。 、筋肉痛、無力症、めまい、下痢）、およびワクチン接種後29日間の未承諾の有害事象。

統計分析 データ入力とデータベース管理は、それぞれ EPIDATA 3.0 と Microsoft Excel 2010 によって実行されました。 データ分析は、Stata 11.0 によって実行されました。 条件付けされたロジスティック回帰を使用して、HCV グループと健常対照グループの連続変数とカテゴリ変数の違いを調べました。 非応答者および低応答者と正常応答者および高応答者のサブ​​グループを、人口統計学的特徴、生化学的指標、肝疾患像、および HCV RNA に関して評価しました。 スチューデントの t 検定または一方向 ANOVA を使用して、異なるサブグループ間の平均抗 HBs 力価を比較しました。 応答率の比較には、フィッシャーの正確確率検定が使用されました。 ノンパラメトリック検定を使用して、イムノドットスポットを比較しました。 スペルマン順位相関分析を使用して、イムノドット スポットと抗 HB の間の相関を評価しました。 これらすべての比較について、両側 P < 0.05 は統計的に有意であると見なされます。