Robustes Ansprechen von Antikörpern und Zytokinen auf den Hepatitis-B-Impfstoff bei nicht in Behandlung befindlichen Patienten mit chronischer Hepatitis C: Eine offene Kontrollstudie in China

Studiendesign und Teilnehmer Die Studie wurde in drei Bezirken (Yucheng, Xintai und Dongchangfu) der Provinz Shandong, China, durchgeführt, die die höchsten gemeldeten HCV-Fallzahlen in der Provinz aufwiesen. Potenzielle Patienten mit chronischer HCV-Infektion wurden rekrutiert, indem die Krankenakten der Krankenhäuser überprüft oder Dorfärzte befragt wurden. Gesunde Personen wurden nach dem Zufallsprinzip 3- bis 5-mal so oft wie potenzielle Patienten mit HCV-Infektion im selben Landkreis ausgewählt. Es wurde eine Fragebogenuntersuchung durchgeführt und Blutproben wurden für jeden potentiellen Patienten und jede gesunde Person auf die gleiche Weise gesammelt.

Fragebogenumfrage Wir führten eine fragebogenbasierte Umfrage durch, um die grundlegenden Informationen der Teilnehmer zu sammeln, einschließlich demografischer Informationen (Alter, Geschlecht, Größe und Gewicht), Krankengeschichte (Allergie, Diagnose und Behandlung von chronischer Hepatitis C, Impfung, Fieber und andere akute Krankheiten) und Verhaltensstatus (Rauchen, Trinken, Schwangerschaft und Stillzeit).

Hepatitis-B-Impfung und Nachsorge Es wurden drei Dosen Hepatitis-B-Impfstoff verabreicht, der durch rekombinante DNA-Techniken in Saccharomyces Cerevisiae (20 μg HBsAg/1,0 ml pro Dosis, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Provinz Guangdong, China) hergestellt wurde intramuskulär in der Deltamuskelregion an alle Teilnehmer nach 0, 1 bzw. 6 Monaten. Blutproben von den Teilnehmern wurden einen Monat nach der ersten und der dritten Impfdosis entnommen.

Laboruntersuchungen und körperliche Untersuchung Screening-Test und körperliche Untersuchung HBsAg, Anti-HBs, HBeAg, Anti-HBe, Anti-HBc, Anti-HCV und HCV-RNA wurden bei allen Probanden bei Aufnahmebesuchen getestet; Serumbilirubin, Serumalbumin, Prothrombinzeit, Plasma-ALT und Aspartataminotransferase (AST) wurden für die HCV-Gruppe nachgewiesen. HBsAg, Anti-HBs, HBeAg, Anti-HBe und Anti-HBc wurden durch Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay (CMIA) (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland) getestet. Anti-HCV wurde durch ELISA mit einem kommerziellen Kit (Intec Products, INC, Xiamen, China) gemessen. HCV-RNA wurde durch quantitative Echtzeit-PCR mit im Handel erhältlichen Kits (QIAGEN, Shenzhen, China) gemessen. Serumbilirubin, Albumin, Prothrombinzeit, Plasma-ALT und AST wurden unter Verwendung von Standardreagenzien und -verfahren gemessen. Um die Krankheitsaktivität zu beurteilen, wurde jeder Patient mit HCV-Infektion klinisch untersucht, einschließlich Befragung, körperlicher Untersuchung und Ultraschall.

Anti-HBs-Assay nach der Impfung Anti-HBs wurde unter Verwendung von CMIA (Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Irland) einen Monat nach der ersten und der dritten Impfdosis nachgewiesen. Obwohl keine serologischen HBV-Marker vorhanden waren, wurden die Probanden als Patienten mit einer Vorgeschichte einer HBV-Infektion oder einer Hepatitis-B-Impfung definiert, wenn ein Monat nach der ersten Impfdosis Anti-HBs ≥ 100 mIU/ml war.

CMI-Assay Vor der ersten Impfdosis und einen Monat nach der dritten Impfdosis wurden 43 Probanden aus der HCV-Gruppe und 37 Probanden aus der gesunden Kontrollgruppe nach dem Zufallsprinzip ausgewählt, um isolierte periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) bzw. die CMI-Funktion, einschließlich Interferon, zu testen -γ (IFN-γ), Interleukin-2 (IL-2), Interleukin-4 (IL-4), Interleukin-5 (IL-5) und Interleukin-6 (IL-6). S28-39-Polypeptid, MHC-Klasse-I-Polypeptid, MHC-Klasse-II-Polypeptid und HBsAg wurden jeweils als zellimmunologisches Stimulans von IFN-γ verwendet. Das Oberflächenantigen des Hepatitis-B-Virus wurde als zellimmunologisches Stimulans von IL-2, IL-4, IL-5 und IL-6 verwendet. S28-39-Polypeptid, MHC-Klasse-I-Polypeptidmischungen und MHC-Klasse-II-Polypeptidmischungen wurden in BO MAI JIE Technology Co. LTD. synthetisiert. (Peking, China). HBsAg wurde von Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd. geliefert. (Shenzhen, China).

Aus EDTA-antikoaguliertem Blut abgetrennte PBMCs wurden auf die Konzentration von 2 × 10 6 Zellen/ml eingestellt. 100 μl 2 × 106 Zellen/ml PBMCs wurden in die vorbeschichteten PVDF-Platten mit 96 Vertiefungen und 100 μl HBsAg S28-39-Peptid (IPQSLDSWWTSL, Endkonzentration: 10 μg/ml), 100 μl MHC-Klasse-I-Polypeptidmischungen, 100, gegeben μl MHC-Klasse-II-Polypeptidmischung oder 100 μl HBsAg (80 μg/ml) in jede Vertiefung. Bei IL-2, IL-4, IL-5 und IL-6 wurden die Platten mit 100 μl 2 × 106 Zellen/ml PBMC und 100 μl HBsAg (80 μg/ml) in jeder Vertiefung geflutet. Dann wurden sie 20 h (IFN-γ, IL-2) oder 40 h (IL-4, IL-5 und IL-6) bei 37 °C in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO2 inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Platten gemäß der Gebrauchsanweisung des R&D ELISPOT Kits (R&D Systems, Inc.) manipuliert. Fleckenbildende Zellen (SFCs) wurden mit dem ImmunoSpotTM-System (Cellular Technology Ltd.) gezählt.

Sicherheitsbewertung Die Teilnehmer erhielten Tagebuchkarten, um das Auftreten und den Schweregrad von erwünschten lokalen Reaktionen an der Injektionsstelle (Schmerzen, Verhärtung, Erythem, Ödem, Juckreiz) während 7 Tagen nach der Impfung, erwünschten systemischen Reaktionen (Fieber, Kopfschmerzen, Müdigkeit, Husten) aufzuzeichnen , Myalgie, Asthenie, Schwindel, Durchfall) und alle unerwünschten Nebenwirkungen während 29 Tagen nach der Impfung.

Statistische Analysen Dateneingabe und Datenbankverwaltung wurden mit EPIDATA 3.0 bzw. Microsoft Excel 2010 durchgeführt. Die Datenanalyse wurde von Stata 11.0 durchgeführt. Unterschiede zwischen der HCV-Gruppe und der gesunden Kontrollgruppe in kontinuierlichen und kategorialen Variablen wurden unter Verwendung konditionierter logistischer Regression untersucht. Untergruppen von Non- und Low-Respondern im Vergleich zu Normal- und High-Respondern wurden in Bezug auf demografische Merkmale, biochemische Indikatoren, Status von Lebererkrankungen und HCV-RNA bewertet. Ein Student-t-Test oder eine einfache ANOVA wurden verwendet, um den durchschnittlichen Anti-HBs-Titer zwischen verschiedenen Untergruppen zu vergleichen. Der exakte Fisher-Test wurde verwendet, um die Ansprechraten zu vergleichen. Nichtparametrischer Test wurde verwendet, um Immundotting-Spots zu vergleichen. Die Spermien-Rang-Korrelationsanalyse wurde verwendet, um die Korrelation zwischen Immundotting-Spots und Anti-HBs zu bewerten. Für alle diese Vergleiche wird ein zweiseitiges P < 0,05 als statistisch signifikant betrachtet.