치료를 받지 않는 만성 C형 간염 환자의 B형 간염 백신에 대한 강력한 항체 및 사이토카인 반응: 중국의 공개 라벨 대조 연구

연구 설계 및 참여자 이 연구는 중국 산동성의 3개 현(Yucheng, Xintai 및 Dongchangfu)에서 수행되었으며, 이 지역에서는 보고된 HCV 사례 수가 가장 많았습니다. 잠재적 만성 C형간염 환자는 병원의 의무기록을 확인하거나 마을 의사에게 문의하여 모집하였다. 건강한 개인은 같은 카운티에서 잠재적인 HCV 감염 환자의 3~5배에 의해 무작위로 선택되었습니다. 설문 조사를 실시하고 각 잠재 환자 및 건강한 개인에 대해 동일한 방식으로 혈액 샘플을 수집했습니다.

설문 조사 참가자의 기본 정보(연령, 성별, 키 및 체중), 병력(알레르기, 만성 C형 간염 진단 및 치료, 예방 접종, 발열, 기타 급성 질환) 및 행동 상태(흡연, 음주, 임신 및 수유).

B형 간염 예방 접종 및 추적 Saccharomyces Cerevisiae에서 재조합 DNA 기술로 만든 B형 간염 백신 3회 용량(용량당 20 μg HBsAg/1.0ml, Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd., Shenzhen, Guangdong Province, China)을 투여했습니다. 각각 0, 1, 6개월에 모든 참가자에게 삼각근 부위에 근육 주사. 참가자의 혈액 샘플은 1차 및 3차 백신 접종 1개월 후에 수집되었습니다.

검사실 분석 및 신체 검사 선별 검사 및 신체 검사 HBsAg, 항-HBs, HBeAg, 항-HBe, 항-HBc, 항-HCV 및 HCV RNA를 포함 방문 시 모든 피험자에 대해 분석했습니다. 혈청 빌리루빈, 혈청 알부민, 프로트롬빈 시간, 혈장 ALT 및 아스파르테이트 아미노전이효소(AST)가 HCV 그룹에서 검출되었습니다. HBsAg, 항-HBs, HBeAg, 항-HBe 및 항-HBc를 Abbott Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay(CMIA)(Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ireland)로 분석했습니다. 항-HCV는 상용 키트(Intec products, INC, Xiamen, China)를 사용하여 ELISA로 측정하였다. HCV RNA는 상업적으로 이용 가능한 키트(QIAGEN, Shenzhen, China)를 사용하여 Quantitative Real-time PCR로 측정했습니다. 혈청 빌리루빈, 알부민, 프로트롬빈 시간, 혈장 ALT 및 AST는 표준 시약 및 방법을 사용하여 측정되었습니다. 질병 활성도를 평가하기 위해 각 HCV 감염 환자는 심문, 신체 검사 및 초음파 검사를 포함한 임상 검사를 받았습니다.

백신 접종 후 항-HBs 분석 항-HBs는 1차 및 3차 백신 접종 1개월 후에 CMIA(Abbott Ireland Diagnostics Division, Sligo, Ireland)를 사용하여 검출되었습니다. 혈청학적 HBV 마커가 없더라도 첫 번째 백신 접종 후 1개월 후에 항-HB가 ≥100 mIU/ml인 경우 피험자는 HBV 감염 또는 B형 간염 백신 접종 이력이 있는 것으로 정의되었습니다.

CMI 분석 1차 접종 전과 3차 접종 1개월 후, HCV군 43명과 건강한 대조군 37명을 무작위로 분리하여 말초혈액단핵세포(PBMC)를 분리하여 인터페론을 포함한 CMI 기능을 검사 -γ(IFN-γ), 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-5(IL-5) 및 인터루킨-6(IL-6). S28-39 폴리펩티드, MHC 클래스 I 폴리펩티드, MHC 클래스 II 폴리펩티드 및 HBsAg를 각각 IFN-γ의 세포 면역 자극제로 사용하였다. B형 간염 바이러스 표면 항원은 IL-2, IL-4, IL-5 및 IL-6의 세포 면역 자극제로 사용되었습니다. S28-39 폴리펩티드, MHC 클래스 I 폴리펩티드 혼합물 및 MHC 클래스 II 폴리펩티드 혼합물을 BO MAI JIE Technology Co. LTD에서 합성하였다. (중국 베이징). HBsAg는 Shenzhen Kangtai Biological Products Co., Ltd.에서 공급했습니다. (중국 심천).

EDTA-항응고 혈액에서 분리한 PBMC는 2×106 cells/mL의 농도로 조절하였다. 사전 코팅된 PVDF 96-웰 플레이트에 100 μL 2 x 106 세포/mL PBMC 및 100 μL HBsAg S28-39 펩티드(IPQSLDSWWTSL, 최종 농도: 10 μg/mL), 100 μL MHC 클래스 I 폴리펩티드 혼합물, 100 μL를 첨가했습니다. 각 웰에 μL MHC 클래스 II 폴리펩타이드 혼합물 또는 100 μL HBsAg(80μg/mL). IL-2, IL-4, IL-5 및 IL-6의 경우 각 웰에 100 μL 2 x 106 세포/mL PBMC 및 100 μL HBsAg(80μg/mL)를 플레이트에 가득 채웠습니다. 그런 다음 37°C, 5% CO2 및 가습 배양기에서 20시간(IFN-γ, IL-2) 또는 40시간(IL-4, IL-5 및 IL-6) 동안 배양했습니다. 인큐베이션 후 플레이트를 R&D ELISPOT 키트(R&D Systems, Inc.) 사용 설명서에 따라 조작했습니다. Spot-forming Cells(SFCs)는 ImmunoSpotTM 시스템(Cellular Technology Ltd.)으로 계수되었습니다.

안전성 평가 참가자에게 백신 접종 후 7일 동안 주사 부위에서 요구된 국소 반응(통증, 경결, 홍반, 부종, 소양증), 요구된 전신 반응(발열, 두통, 피로, 기침)의 발생 및 중증도를 기록하는 다이어리 카드를 제공했습니다. , 근육통, 무력증, 현기증, 설사) 및 백신 접종 후 29일 동안 원치 않는 부작용.

통계 분석 데이터 입력 및 데이터베이스 관리는 각각 EPIDATA 3.0 및 Microsoft Excel 2010에서 수행되었습니다. 데이터 분석은 Stata 11.0으로 수행되었습니다. 조건부 로지스틱 회귀를 사용하여 연속 및 범주형 변수에서 HCV 그룹과 건강한 대조군 간의 차이를 조사했습니다. 인구통계학적 특성, 생화학적 지표, 간 질환 상태 및 HCV RNA와 관련하여 비반응자 및 저반응자 대 정상 및 고반응자의 하위 그룹을 평가했습니다. 스튜던트 t 테스트 또는 일원 ANOVA를 사용하여 서로 다른 하위 그룹 간의 평균 항-HB 역가를 비교했습니다. 응답률을 비교하기 위해 Fisher의 정확 검정을 사용했습니다. 면역도팅 반점을 비교하기 위해 비모수 테스트를 사용했습니다. Sperman rank correlation analysis를 사용하여 immunodotting spot과 anti-HB 사이의 상관 관계를 평가했습니다. 이러한 모든 비교에서 양면 P<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.